甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白复合乳佐剂应用于狂犬病疫苗的免疫效果评价
发布时间：2020-07-23 23:46
【摘要】：狂犬病是由狂犬病毒引起的人畜共患传染病,全世界范围每年超过55000人丧命于狂犬病毒感染,其中大部分人群来着中国、印度、巴基斯坦等发展中国家。当前市场上预防狂犬病多用灭活狂犬疫苗,但免疫程序复杂需要在28天内注射4-5次,作为免疫效果较好副作用低的人二倍体狂犬疫苗面临着价格昂贵产量不足的情况,在使用无佐剂狂犬疫苗情况下,中和抗体滴度至少需要14天方可达到有效保护水平,不能满足暴露个体尽早产生保护性中和抗体的需要。佐剂的使用可有效的降低狂犬病疫苗用量,提升免疫保护能力,提早产生中和抗体,探寻狂犬病疫苗佐剂对于狂犬病的控制有着重要意义。甲型副伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白是鞭毛丝的结构组成部分,作为TLR5激动剂被识别,将鞭毛蛋白与抗原混合或者融合表达,已应用于多种疫苗中,TLR5位于多种免疫细胞表面,可触发炎性因子、趋化因子、干扰素的分泌启动天然免疫应答。还可募集T、B淋巴细胞至淋巴器官促进APC的活化,同时增强细胞免疫和体液免疫应答。本研究以角鲨烯、司盘、吐温、甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白为原料制备了平均粒径在187nm左右的复合乳佐剂,该佐剂可以加速中和抗体的产生,增强特异性和非特异性免疫应答。通过快速荧光灶抑制试验发现中剂量甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白复合乳佐剂在首针免疫后第7天即可产生0.5 IU/ml的中和抗体,中和抗体(1.0 IU/ml)显著高于全剂量疫苗组(0.38 IU/ml),第14天中和抗体达到3.8 IU/ml,高于全剂量疫苗组(2.2 IU/ml)。该佐剂组小鼠分泌IFN-γ和IL-4的淋巴细胞数量显著提升。免疫后注射部位肌肉免疫趋化因子MCP-1、MIP-1a mRNA表达上调,在6 h达到峰值。攻毒挑战试验中甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白复合乳佐剂生存率为100%。小鼠心、肝、脾、肺、肾的病理切片与疫苗对照组无异常变化证明佐剂安全性良好。采用肌肉模拟自然感染的小鼠模型研究甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白复合乳佐剂联合疫苗在暴露后免疫研究中发现肌肉注射、皮内注射免疫途径下存活率均高于无佐剂组,皮内免疫效果最佳,并且可显著降低抗原用量。综上所述,甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白复合乳佐剂能够有效的降低狂犬病疫苗的使用剂量,并具有良好的安全性和免疫原性。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R392
【图文】：
逦中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文逦逡逑析仪、透射电镜检查。复合乳佐剂：乳佐剂＋甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白充分混合，逡逑鞭毛蛋白终浓度为１００网／ｍｌ，使用０．４５邋ｐｍ膜，除菌过滤分装编号４°Ｃ保存。本研逡逑究中乳佐剂配方参考ＭＦ５９制备，在后文中简称为ＭＦ５９。逡逑／逦Ｎ逡逑
中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文电泳结束后，取下凝胶膜，卸下硅胶框，将凝胶放置培养皿中加入固定处理；逡逑加入预先配置的考马斯亮蓝染色液染色４０邋ｍｉｎ；逡逑加入考马斯亮蓝脱色液体脱色，约２ｈ后更换新的脱色液继续脱色晰。逡逑验结果逡逑佐剂的质量检g义献艏镣夤鄢嗜榘咨煌该鳎婊∪蔚娜樽艏粮鳎插澹恚旆直疱澹恚椋睿╁澹担埃埃板澹颍穑恚ǎ保板澹恚椋睿福埃埃板澹颍穑恚ǎ保板澹恚椋睿保埃埃埃板澹颍穑恚ǎ玻板澹恚椋睿┨跸址植阋约捌迫榈南窒蟆ｅ义隙姆治鲆橇＞都觳饨峁义
本文编号：2768001
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R392
【图文】：
逦中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文逦逡逑析仪、透射电镜检查。复合乳佐剂：乳佐剂＋甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白充分混合，逡逑鞭毛蛋白终浓度为１００网／ｍｌ，使用０．４５邋ｐｍ膜，除菌过滤分装编号４°Ｃ保存。本研逡逑究中乳佐剂配方参考ＭＦ５９制备，在后文中简称为ＭＦ５９。逡逑／逦Ｎ逡逑
中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文电泳结束后，取下凝胶膜，卸下硅胶框，将凝胶放置培养皿中加入固定处理；逡逑加入预先配置的考马斯亮蓝染色液染色４０邋ｍｉｎ；逡逑加入考马斯亮蓝脱色液体脱色，约２ｈ后更换新的脱色液继续脱色晰。逡逑验结果逡逑佐剂的质量检g义献艏镣夤鄢嗜榘咨煌该鳎婊∪蔚娜樽艏粮鳎插澹恚旆直疱澹恚椋睿╁澹担埃埃板澹颍穑恚ǎ保板澹恚椋睿福埃埃板澹颍穑恚ǎ保板澹恚椋睿保埃埃埃板澹颍穑恚ǎ玻板澹恚椋睿┨跸址植阋约捌迫榈南窒蟆ｅ义隙姆治鲆橇＞都觳饨峁义
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