逆行灌注法对兔移植肾EGF、MPO表达影响的实验研究

发布时间：2020-08-18 15:23

【摘要】：[目的]利用新西兰雄性白兔制备肾移植模型,采用经肾动脉顺行持续低温灌注与经肾静脉逆行持续低温灌注两种不同灌洗方法保存家兔供肾并行同种异体肾移植术,观察肾移植术后新西兰白兔血清肌酐(Serum cr eat in,Scr)及尿量、移植肾组织病理、移植肾组织中表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达水平,初步探讨不同灌注方法对供肾质量的影响,为临床实践中供体器官保存和提高肾动脉畸形等边缘供肾的利用率提供新的思路。[方法]选取成年健康雄性新西兰白兔作为肾移植供体、受者,体重均为2.0-3.0kg。将60只新西兰白:兔按1-60编号,采用完全随机设计(随机数字表法)将其分为2组,顺行持续低温灌注组(A组)和逆行持续低温灌注组(B组)每组各30只,再于A、B两组组内将白兔随机分为供体与受体两组,每组15只。将A、B两组供体热缺血15min左侧肾脏按不同组的方法灌注2小时后移植到受体原位,移植完成后去除受体右肾。术后予以环孢素A抗排斥治疗,比较顺、逆行2种不同灌注组受体新西兰白兔术后第一天、第三天、第五天的血清肌酐水平及尿量情况,观察术后第五天时移植肾组织病理、移植肾组织EGF和MPO的表达情况。[结果]1、血肌酐变化A组(顺行灌注组)术后第一天、第三天、第五天血清肌酐值分别为(323.89±19.15)umol/L、(203.34±14.02)umol/L、(121.51±8.76)umol/L;B组(逆行灌注组)术后第一天、第三天、第五天血清肌酐值分别为(335.11±18.62)umol/L、(212.03±9.66)umol/L、(125.94±7.35)umol/L。两者相比较,逆行灌注组术后血肌酐值与顺行灌注组术后血肌酐值对比无明显差别,P0.05,差异不具有统计学意义。2、尿量变化A组(顺行灌注组)术后第一天、第三天、第五天尿量分别为(96.36±9.36)ml、(129.91±10.72)ml、(168.40±12.34)ml;B组(逆行灌注组)术后第一天、第三天、第五天尿量分别为(91.89±8.30)ml、(123.78±10.79)ml、(158.23±16.46)ml。两者相比较,逆行灌注组术后尿量与顺行灌注组术后尿量对比无明显差别,P0.05,差异不具有统计学意义。3、移植肾组织病理(HE 染色,hematoxylin and eosin staining)两组移植肾病理切片HE染色检查结果显示术后第五天的病理改变,A组(顺行灌注组)和B组(逆行灌注组)移植肾的肾小球和肾小管结构接近正常,间质水肿和炎症细胞的浸润比较少,逆行灌注组术后组织结构与顺行灌注组术后组织结构对比无明显差别,P0.05,差异不具有统计学意义。4、移植肾组织免疫组化检测EGF表达情况。A组(顺行灌注组)术后第五天EGF阳性表达率(23.27±4.48)%,B组(逆行灌注组)术后第五天EGF阳性表达率(20.70±3.34)%,两者相比较,逆行灌注组术后EGF表达情况与顺行灌注组术后EGF表达情况对比无明显差别,P0.05,差异不具有统计学意义。5、移植肾MPO检测A组(顺行灌注组)术后第五天MPO表达(0.474±0.07)U/g,B组(逆行灌注组)术后第五天MPO表达(0.425±0.08)U/g,两者相比较,逆行灌注组术后MPO表达情况与顺行灌注组术后MPO表达情况对比无明显差别,P0.05,差异不具有统计学意义。[结论]逆行灌注法同顺行灌注法一样有保护移植肾功能的作用。尤其对因肾动脉畸形、狭窄等原因所致的供肾灌注不良,经肾动脉无法充分灌注时,采取经肾静脉的逆行灌注可作为有效的补救灌注措施。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R699.2;R-332
【图文】：

决定是否需要继续推注（推注速度过快或者过量都易指致死亡，宁少勿多，术中可以研腹腔追加少量麻醉药物），待麻醉效果满意后，将白兔仰卧于操作台上，四肢用兔肢固定夹固定，头用兔头固定夹固定，手术区领用电动剃刀剔除毛发，清洗后消毒，最后铺上无菌洞巾，所用手术器低均所 70%酒精中浸泡消毒。2.2.3.2 移植供肾缺血模型沿腹部正中线纵行切开皮肤、肌肉等，打开腹腔，用皮肤拉钩拉开两侧皮肤和肌肉，无菌湿纱布研右侧推开胃肠等腹腔脏器，暴露左侧肾脏及腹腔血管，可见左侧肾脏位于腹膜后。用无齿镊、玻璃分针及湿棉签仔细分离肾周，游离左侧肾脏动脉、静脉至起始部，7-0 细丝线分专所起始部结扎肾动静脉，并记录缺血时间。无菌湿盐水纱布覆盖腹腔脏器，如图 2.2-2.3 所示，可见肾脏颜色由鲜苏色逐渐变暗黑色，由此模拟临床供肾获取前肾脏所需经历的热缺血过程。

决定是否需要继续推注（推注速度过快或者过量都易指致死亡，宁少勿多，术中可以研腹腔追加少量麻醉药物），待麻醉效果满意后，将白兔仰卧于操作台上，四肢用兔肢固定夹固定，头用兔头固定夹固定，手术区领用电动剃刀剔除毛发，清洗后消毒，最后铺上无菌洞巾，所用手术器低均所 70%酒精中浸泡消毒。2.2.3.2 移植供肾缺血模型沿腹部正中线纵行切开皮肤、肌肉等，打开腹腔，用皮肤拉钩拉开两侧皮肤和肌肉，无菌湿纱布研右侧推开胃肠等腹腔脏器，暴露左侧肾脏及腹腔血管，可见左侧肾脏位于腹膜后。用无齿镊、玻璃分针及湿棉签仔细分离肾周，游离左侧肾脏动脉、静脉至起始部，7-0 细丝线分专所起始部结扎肾动静脉，并记录缺血时间。无菌湿盐水纱布覆盖腹腔脏器，如图 2.2-2.3 所示，可见肾脏颜色由鲜苏色逐渐变暗黑色，由此模拟临床供肾获取前肾脏所需经历的热缺血过程。

注射器及时抽吸干净，灌注时间控制所 2 小时。灌注结束后，修剪左侧输尿管周围结缔组织，预留部分结缔组织以保证血供,研下游离出输尿管直至膀胱处并剪断。拔出肾动脉（或肾静脉）留置针，并将肾动静脉所起始处剪断，静脉切口边缘用 9-0 尼龙线一针以示标记。将左肾连同输尿管整块卸下并放入 0-4℃离体肾保存液中。图 2.4 顺行灌注模型（灌注 5min 后） 图 2.5 逆行灌注模型（灌注 5min 后）

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本文编号：2796391