SKP2、TFEB在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用

发布时间：2020-08-20 06:29

【摘要】：第一部分Skp2在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用目的:蜕膜细胞的增殖与凋亡的动态平衡是维持蜕膜化正常进行的关键。Skp2作为促进细胞从G1期向S期转换的重要调控因子,它可以使cyclin、CKI等靶蛋白泛素化,从而调节细胞周期,进而参与细胞增殖和凋亡的调控。研究发现,Skp2在多种癌症的发生过程中发挥重要作用,但其在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用尚不清楚。本研究拟在观察Skp2在围着床期小鼠子宫内膜表达规律的基础上,初步探讨Skp2在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用。方法:1.构建早孕小鼠正常妊娠模型与假孕模型并用免疫组化与Western blot检测Skp2的表达。2.构建早孕小鼠体内人工诱导蜕膜化模型并用免疫组化与Western blot检测蜕膜化诱导前后Skp2的表达。3.构建体外原代小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化诱导模型并用Western blot检测细胞诱导前后Skp2的表达。4.构建Skp2过表达的原代小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化诱导模型,Western blot检测蜕膜标志物BMP2、MMP2、HOXA10和Skp2在小鼠子宫内膜基质细胞中的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:1.Western blot和免疫组化结果显示,随着妊娠天数的递增,Skp2在正常妊娠第5、6、7天(D5、D6、D7)的小鼠子宫内膜组织的蛋白表达显著低于正常妊娠第1天(D1);Skp2在正常妊娠D5、D6、D7子宫内膜着床点组织的蛋白表达明显低于D5、D6、D7的子宫内膜着床旁组织。2.Western blot和免疫组化结果显示,Skp2在假孕第4天(PD4)小鼠子宫内膜组织的蛋白表达显著高于PD6、PD7。3.Western blot和免疫组化结果显示,蜕膜化诱导侧子宫内膜组织Skp2蛋白表达明显低于未诱导侧子宫内膜组织。4.Western blot结果显示,原代小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化诱导后Skp2蛋白表达明显低于未诱导组,上调Skp2表达后,蜕膜标志物BMP2、MMP2、HOXA10表达紊乱。流式细胞术检测结果显示,上调Skp2表达后,细胞凋亡显著增加。结论:该研究初步揭示了Skp2参与调节早孕小鼠子宫内膜蜕膜化,其具体机制有待进一步研究。第二部分TFEB在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用目的:TFEB可通过调控自噬-溶酶体途径在诸多生理病理过程中影响细胞凋亡。在蜕膜化进程中,蜕膜细胞的增殖与退化同时并存,二者在动态平衡中协调蜕膜细胞的数量和滋养细胞的侵蚀,维持蜕膜化的正常进行。课题组前期发现FOXO3a可能通过细胞凋亡途径参与妊娠早期子宫内膜蜕膜化。作为可被FOXO3a负调控的下游分子TFEB是否同样参与妊娠早期子宫内膜蜕膜化尚不清楚。因此,本研究旨在分析TFEB在围着床期小鼠子宫内膜中的表达规律,初步探讨TFEB在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用。方法:1.构建早孕小鼠正常妊娠模型与假孕模型并用q PCR与Western blot检测TFEB的表达。2.构建早孕小鼠体内人工诱导蜕膜化模型并用q PCR与Western blot检测TFEB的表达。3.构建体外原代小鼠子宫内膜基质细胞人工诱导蜕膜化模型并用q PCR与Western blot检测TFEB的表达。结果:1.Western blot和Real-time PCR结果显示,随着孕期天数的增加,TFEB在D4、D5、D6的表达逐渐减少;Western blot、Real-time PCR和免疫组化的结果显示,TFEB在D5子宫内膜着床点组织的表达明显低于D5子宫内膜着床旁组织。2.Western blot和Real-time PCR结果显示,小鼠体内蜕膜化诱导侧子宫内膜组织TFEB表达明显低于未诱导侧子宫内膜组织。3.Western blot和Real-time PCR结果显示,原代小鼠子宫内膜基质细胞体外蜕膜化诱导后TFEB表达明显低于未诱导组。结论:本研究初步揭示TFEB可能与妊娠早期小鼠子宫内膜蜕膜化有关,但其具体调节作用有待后续进一步深入探讨。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R394
【图文】：

娠 D5、D6、D7 着床点和着床旁组织中的表达。β-actin 作为内参蛋白。*P<0.05，***P<0.001；IIS：着床旁子宫内膜，IS：着床点子宫内膜。n=3。Fig 1 Expression of Skp2 in the endometrium of early pregnant miceA：Protein expression of Skp2 in the endometrium of early pregnant mice on D1, D4, D5, D6,D7 (The right histogram is the grayscale statistical analysis of the left protein band). B:Western blot were used to detect the expression of Skp2 in implantation sites andinter-implantation site on D5, D6, D7 endometrium in early pregnant mice (The righthistogram is the grayscale statistical analysis of the left protein band). C:Immunohistochemistry were used to detect the expression of Skp2 in the endometrium of earlypregnant mice on D1, D4 and in implantation sites and inter-implantation site on D5, D6, D7endometrium in early pregnant mice (The right histogram is the grayscale statistical analysisof the left protein band). β-actin was used as a loading control; *P<0.05, ***P<0.001; IIS:inter-implantation site, IS: implantation site; n=3.

38图 1 TFEB 在早孕小鼠子宫内膜的表达情况A：TFEB 在早孕小鼠 D4、D5、D6 和 PD4、PD5、PD6 子宫内膜中的蛋白表达情况（右侧柱状图为左侧蛋白条带的灰度统计分析结果）；B：Real-time PCR 检测结果；C：Western blot检测结果（右侧柱状图为图 1C 蛋白条带的灰度统计分析结果）；D：免疫组化检测 TFEB 在

图 2 小鼠体内子宫内膜人工诱导蜕膜化后 TFEB 表达减少A：小鼠体内子宫内膜人工诱导蜕膜化模型构建；B：Real-time PCR 检测显示人工诱导蜕膜化后 TFEB mRNA 表达显著减少；C：Western blot 检测显示人工诱导蜕膜化后 TFEB 蛋白表达显著减少（右侧柱状图为图 2C 蛋白条带的灰度统计分析结果）。β-actin 作为内参蛋白；*P<0.05，**P<0.01。ID：蜕膜化诱导侧，采用宫角注射玉米油的方法进行蜕膜化诱导；IDC：未诱导侧，宫角未做任何处理。n=3。Fig 2 Expression of TFEB were decreased in vivo artificially induced decidualization modelA: Construction of artificially induced decidualization model of endometrium in mice. B:Real-time PCR results showed that TFEB mRNA expression was significantly decreased afterartificially induced decidualization. C: Western blot analysis showed that the expression ofTFEB protein was significantly decreased after artificially induced decidualization (The righthistogram is the grayscale statistical analysis of the left protein band). β-actin was used as aloading control; *P<0.05, **P<0.01; ID: decidualization-induced side, decidualization

【参考文献】

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本文编号：2797648