人胚胎干细胞源神经干细胞条件培养液对雪旺细胞生物学特性研究

发布时间：2020-08-22 16:51

【摘要】：研究背景多年以来神经损伤后的修复一直是医学难题,迄今为止,神经的自体移植仍然是神经断端治疗的“金标准”,但是此种方式存在供体不足的缺点。为此,人们寻找各种替代材料,如壳聚糖、蚕丝蛋白、纤维导管等,这些材料对于神经功能的修复,虽然取得一定的进展,但是仍然不能令人满意。神经损伤后包裹轴突的髓鞘细胞-雪旺细胞起着主要的修复作用,对轴突的再生修复起着支持和引导的作用,并能分泌多种细胞因子营养支持轴突的再生并能吞噬细胞炎症过程中产生的细胞碎片。我们前期研究发现间充质干细胞能修复SD大鼠坐骨神经的压榨伤,具有使神经功能得到改善的作用。胚胎干细胞是全能干细胞,具有向各个方向分化的潜能,经适当的微环境诱导可以向特定的细胞群分化,具有广阔的临床应用前景和价值,同时人胚胎干细胞及其诱导产物,在进一步的临床应用中避免了异种移植带来的免疫排斥反应,人胚胎干细胞源神经干细胞在神经损伤的修复中可能提供各种营养因子和信号帮助修复,是潜在的神经修复组织功程材料。研究目的探讨人胚胎干细胞源神经干细胞的诱导分化及神经干细胞条件培养液(human embryonic stem cell-derived neural stem cells conditioned medium,h ESCN-CM)对大鼠坐骨神经雪旺细胞的生物学作用,为周围神经损伤修复提供新的思路。研究方法(1)人胚胎干细胞源神经干细胞诱导分化及神经球培养;(2)流式细胞术、免疫荧光鉴定神经干细胞;(3)SD大鼠原代雪旺细胞的分离纯化;(4)h ESCN-CM制备;(5)CCK-8实验检测雪旺细胞的增殖;(6)划痕实验和Transwell实验检测雪旺细胞的迁移;(7)RT-q PCR检测雪旺细胞的基因表达。研究结果(1)人胚胎干细胞经诱导分化后,呈现典型的玫瑰花环结构,人胚胎干细胞源神经干细胞膜表面不表达Nestin、βⅢTubulin,细胞质内表达Nestin、βⅢTubulin,双阳性细胞高达98.14%。(2)大鼠雪旺细胞经纯化后高表达S100、MBP阳性率分别为99.0%和94.6%。(3)50%h ESCN-CM能促进雪旺细胞的增殖,100%h ESCN-CM为抑制增殖。50%h ESCN-CM和100%h ESCN-CM均能促进RSC96的增殖。(4)h ESCN-CM能促进雪旺细胞的迁移。(5)在50%h ESCN-CM作用下4 h,NT3、VEGF、b FGF、NGF的表达增高,IGF-1变化不明显。研究结论(1)体外成功诱导人胚胎干细胞分化为神经干细胞。(2)h ESCN-CM在适当浓度可以促进雪旺细胞的增殖和迁移。(3)h ESCN-CM在适当浓度能促进雪旺细胞NT3、VEGF、b FGF、NGF基因表达。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2
【图文】：

神经的解剖结构

人胚胎干细胞源神经干细胞条件培养液对雪旺细胞生物学特性研究

技术路线图

人胚胎干细胞源神经干细胞条件培养液对雪旺细胞生物学特性研究

神经干贴壁细胞

【参考文献】