转ie2基因荷胶质瘤小鼠的建立及该基因对肿瘤自身状态影响的研究

发布时间：2020-08-27 11:06

【摘要】：目的人巨细胞病毒(HCMV)是一种双链DNA病毒,在人群中的感染率普遍存在,并且其分子质量较大,属于疱疹病毒家族中的一员。在病毒感染的初期表现为急性感染,之后HCMV就会建立起潜伏感染,最终会伴随持续宿主的一生,直至宿主死亡。在病毒感染初期,HCMV早期基因ie2基因会最早表达,该基因编码的IE86蛋白在病毒感染过程中起到了重要的调节作用。但由于HCMV具有严格的种属特异性,这让我们在宿主选择上遇到了极大的挑战,因此我们构建了转基因小鼠动物模型,并对转ie2基因鼠进行荷瘤,在此基础上我们研究了基因与肿瘤之间的相互作用。方法1.对转HCMV ie2基因小鼠和非转基因野生鼠进行荷瘤,对注射肿瘤后小鼠的生长状态进行观察并记录,处死小鼠后对离体的肿瘤进行测量与检测,从而确定ie2基因对荷瘤前后小鼠生长状态的影响。2.平行组实验采用同样方法对转基因鼠和野生鼠进行荷瘤,荷瘤成功后不进行处死实验,记录荷瘤鼠的死亡日期,计算并比较生存率,从而确定ie2基因对荷瘤后小鼠生存状态的影响。3.对成瘤小鼠的肿瘤组织采用HE染色,进一步观察ie2阳性荷瘤鼠与阴性荷瘤鼠肿瘤组织细胞形态的差异。4.采用普通PCR的方法对胶质瘤的标志性转录因子ATF5进行定性的检测,再采用Real-time PCR的方法,对荷瘤鼠的肿瘤组织和脑部组织中ATF5表达量多少进行定量的检测,采用Western-blotting的方法检测转基因荷瘤鼠肿瘤组织中ATF5的表达量与IE86蛋白表达量之间的关系。结果1.选用了两种鼠胶质瘤细胞GL261和G422进行细胞培养,筛选出最易培养、增殖率最高的GL261细胞进行后期荷瘤实验,荷瘤后发现转ie2基因鼠肿瘤生长状态更迅速且小鼠生存时间缩短。2.对离体的肿瘤组织进行石蜡切片,HE染色观察阴性鼠肿瘤组织细胞形态边界清晰,细胞疏松;阳性鼠肿瘤组织细胞不规则,边界不清且细胞密集。3.对转基因小鼠和未转基因小鼠进行荷瘤,荷瘤后对肿瘤组织和脑部组织进行剥离,之后采用Real-time PCR的方法对ATF5进行定量检测,可发现转HCMV ie2基因鼠和未转基因鼠肿瘤组织中ATF5均高表达,脑部组织中未见ATF5表达或可见ATF5低表达。4.蛋白检测:对离体的阳性小鼠肿瘤组织进行蛋白提取,采用Westernblotting的方法检测ATF5与IE86蛋白之间的定量关系,结果显示转基因荷瘤鼠中ATF5呈现高表达状态。结论1.成功建立了转ie2基因荷胶质瘤小鼠动物模型,为研究HCMV IE基因及其编码蛋白IE86在胶质瘤发生发展中的作用机制提供思路。2.相比ie2阴性的荷胶质瘤小鼠,转ie2基因荷胶质瘤小鼠的生存状态更差,生存时间更短;胶质瘤标志性的转录因子ATF5的基因和蛋白表达水平均增高,以上证据提示:HCMV ie2基因的表达与胶质瘤的恶性程度相关。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.4;R-332

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本文编号：2806018