移植静脉再狭窄人鼠嵌合模型的建立

发布时间：2020-09-27 07:26

　　 目的:探索一种新型移植静脉再狭窄人鼠嵌合模型,为冠状动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄的研究提供可靠的动物模型。方法:随机选择18只F344RG大鼠,将其分为3组,每组6只。应用改良套管法建立模型并于术后第7(T1)、28(T2)、84(T3)天预设时间点行超声检查并处死,取出移植静脉,行HE染色并测定内膜增厚程度,免疫组化染色检测α-SMA表达及分布情况,Western-Blot检测mTORC1及mTORC2自身和下游蛋白表达变化情况。结果:18只受体大鼠有15只存活至预期时间且无血运障碍表现。3只受体大鼠因凝血及感染原因死亡。HE染色可见移植静脉内膜增生并随时间而加重,内膜/(中膜+外膜)比例上升;免疫组化可见α-SMA表达增加并且分布更加密集;WB分析可见Rictor、PKC-α在T1至T3表达增高并高于对照组,Raptor、eIF4e在T1时间点表达降低、T2、T3恢复正常水平。结论:通过实验建立了一种新型移植静脉再狭窄人鼠嵌合模型,并对mTOR通路部分蛋白进行分析。为今后进行mTOR通路相关研究提供一种动物模型。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R654.2;R-332
【部分图文】：

雷帕霉素复合物相关的结构［２７１。ｍＴＯＲＣｌ和２均响应生长因子而被激活。ＡＫＴ活化通过抑逡逑制ＴＳＣ复合物刺激ｍＴＯＲＣｌ活化，导致ｍＴＯＲＣｌ去阻遏。作为ｍＴ０ＲＣ２的底物，ＡＫＴ逡逑还起到在两个ＴＯＲＣ复合物之间建立反馈环的作用。图２阐述了邋ｍＴＯＲＣｌ和２下游的主要逡逑途径。逡逑ｍＴＯＲＣｌ维持合成代谢过程的平衡，包括核糖体生物合成和核苷酸，脂质逡逑和蛋白质的产生，其分解代谢过程包括细胞周期停滞，细胞死亡和自噬。由逡逑ｍＴＯＲＣｌ活化诱导的核苷酸产生包括通过磷酸化ｐ７０Ｓ６Ｋ和ＡＴＦ４从头合成嘧啶逡逑和嘌呤。具体而言，Ｐ７０Ｓ６Ｋ激活ＣＡＤ（氨基甲酰磷酸合成酶２，天冬氨酸转氨甲逡逑３逡逑

取邋２０Ｇ邋ｌ．ｌｍｍｘ３０ｍｍ邋ＢＤ邋Ｉｎｔｉｍａ邋ＩＩ邋ＰＬＵＳ邋静脉留置针，外径邋１．３ｍｍ，内径逡逑１．１ｍｍ，抽出内芯，剪取１．２ｃｍ，修剪一端呈楔形，浸没于肝素生理盐水中备用。逡逑如图３所示，按示意图中步骤，用精细剪刀将远心端血管夹上缘５ｍｍ处的逡逑大鼠主动脉前壁剪开约０．８ｍｍ，将楔形端插入破口并将整根处理后的静脉留置逡逑针插入主动脉腔内。以ＰＲＯＬＥＮＥ邋８－０邋Ｗ２７７７邋ＥＴＨＩＣＯＮ缝线缝合破口，并将留逡逑置针向下移动，使其远端位于主动脉缝合口以下。在距离留置针两端约３＿处逡逑用ＭＥＲＳＩＬＫ４－０邋Ｗ５０１Ｈ邋ＥＴＨＩＣＯＮ缝线将主动脉与留置针一同捆扎，固定留置逡逑针的位置。用精细剪刀在手术段血管正中连同主动脉及留置针一并剪断。此时逡逑两断端会回缩，两者将分离约５－６ｍｍ。将断端的主动脉翻折呈“袖套”样，并用逡逑１０逡逑

图４．邋Ａ所示为移植静脉位于受体中；Ｂ为取下的移植静脉逡逑

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本文编号：2827593