锌相关蛋白在肥胖大鼠睾丸及睾周脂肪中的表达和定位

发布时间：2020-09-25 20:09

　　 目的:本研究构建肥胖大鼠动物模型,通过检测睾丸及睾周脂肪组织中锌相关蛋白(PRDM16,ZBTB32以及ZAG)的表达及定位,旨在探讨锌相关蛋白在肥胖雄性大鼠生殖中的价值。方法:从河北医科大学动物实验中心购买清洁级雄性SD大鼠20只,平均体重为(103±11)g,适应性喂养一周后,将20只SD雄性大鼠随机分成正常组6只和肥胖组14只;其中正常组大鼠给予普通饲料喂养,肥胖组给予高脂饲料喂养。每周同一时间对大鼠体重进行测量。第12周末时,以肥胖组大鼠体质量大于正常组平均体质量的20%为肥胖模型构建成功。最终成功构建肥胖大鼠模型7只。取大鼠双侧睾丸及睾周脂肪组织称重,同时取新鲜大鼠附睾尾部检测精子浓度及活力;采用HE染色和免疫组织化学法观察肥胖对睾丸组织形态学影响以及PRDM16、ZBTB32和ZAG在睾丸组织中的定位;Western Blot检测PRDM16、ZBTB32以及ZAG在大鼠睾丸及睾周脂肪中蛋白表达;荧光定量PCR检测PRDM16、ZBTB32和ZAG在大鼠睾丸及睾周脂肪中mRNA表达。结果:1.正常组和肥胖组大鼠精液参数分析通过对两组大鼠的精液参数进行分析,结果发现肥胖组大鼠精子浓度和活力显著低于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。2.正常组和肥胖组大鼠睾丸形态学变化HE染色结果显示,睾丸生精小管由多层不同发育阶段的生精细胞组成,正常组大鼠睾丸生精小管排列整齐,管腔内各级生精细胞层次清楚,结构完整,管腔内可见大量精子;而肥胖组大鼠睾丸生精小管排列疏松,间质变宽,睾丸生精上皮结构不完整,生精细胞层数减少,且出现空泡样改变,管腔内精子数量减少。3.PRDM16、ZBTB32和ZAG在睾丸组织中的定位免疫组织化学结果显示,PRDM16、ZBTB32和ZAG主要表达于大鼠睾丸生精细胞胞质中,且PRDM16在肥胖大鼠睾丸组织中的表达显著低于正常组,而ZBTB32和ZAG在两组大鼠睾丸组织表达无统计学差异(P0.05)。4.PRDM16、ZBTB32和ZAG在两组大鼠睾丸及睾周脂肪中mRNA表达荧光定量PCR结果显示,PRDM16在肥胖组大鼠睾丸及睾周脂肪中mRNA的表达显著降低;ZAG在肥胖大鼠睾周脂肪中mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05),ZAG在肥胖大鼠睾丸组织中mRNA的表达与正常组相比无统计学差异(P0.05);ZBTB32在正常组和肥胖组大鼠睾丸及睾周脂肪中mRNA的表达无统计学差异(P0.05)。5.PRDM16、ZBTB32和ZAG在两组大鼠睾丸及睾周脂肪中蛋白表达Western Blot结果显示,与正常组大鼠相比,肥胖组大鼠睾丸及睾周脂肪中PRDM16蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05);肥胖组大鼠睾周脂肪中ZAG蛋白表达显著低于正常组,差异有统计学意义(P0.05);而肥胖组大鼠睾丸组织ZAG的蛋白表达与正常大鼠相比无统计学差异(P0.05),ZBTB32的蛋白表达在两组大鼠睾丸及睾周脂肪中差异均无统计学意义(P0.05)。结论:1.与正常组大鼠相比,肥胖组大鼠睾丸组织形态被明显破坏,精子浓度和精子活力显著降低,提示肥胖对雄性生殖具有明显的影响。2.锌相关蛋白PRDM16、ZBTB32和ZAG主要表达于大鼠生精细胞胞质中;PRDM16在肥胖大鼠睾丸及睾周脂肪中mRNA和蛋白表达均显著低于正常组;肥胖大鼠睾周脂肪中ZAG mRNA和蛋白表达与正常组相比显著降低,提示肥胖可能导致锌相关蛋白表达异常,影响雄性大鼠生殖。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R589.2;R-332
【部分图文】：

正常组和肥胖组大鼠睾丸HE染色Fig.1HEstainingoftestistissuemorphologyinnormalandobeserats.A：CD

免疫组织化学法检测正常组和肥胖组大鼠睾丸PRDM16的表达（IHC,×100）

免疫组织化学法检测正常组和肥胖组大鼠睾丸ZBTB32表达（IHC,×100）

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 汤尤怡;马艳华;;肥胖与男性不育关系的研究进展[J];生殖医学杂志;2015年04期

2 张耀东;谭利娜;罗淑颖;陈永兴;卫海燕;;郑州地区男童阴茎和睾丸发育现状及超重/肥胖对其的影响[J];中国当代儿科杂志;2015年01期

3 饶志坚;袁海平;史仍飞;;锌α2糖蛋白生物学功能[J];中国生物化学与分子生物学报;2014年12期

4 宋红霞;张思仲;;生精相关基因Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达和定位研究[J];重庆医科大学学报;2014年11期

5 王增武;郝光;王馨;陈祚;张林峰;郭敏;田野;邵澜;朱曼璐;吴可贵;;我国中年人群超重/肥胖现况及心血管病危险因素聚集分析[J];中华高血压杂志;2014年10期

6 景彩霞;杨加周;庞秋霞;艾庆燕;王艳梅;赵豫凤;;GATA-4在小鼠生殖腺中的表达定位研究[J];延安大学学报(医学科学版);2014年02期

7 郑全辉;陆斌;葛淑芝;张爱红;;锌指蛋白185通过与肌动蛋白纤维结合抑制肿瘤细胞增殖[J];中国老年学杂志;2012年21期

8 冯卫国;潘智芳;连波;陈丽梅;刘顺梅;刘晓影;高志芹;;锌指蛋白(ZNF)185在小鼠不同发育阶段睾丸中的表达[J];生殖与避孕;2012年10期

9 张东梅;徐韫健;曾丽微;张丽梅;谭惠明;;精浆锌含量与精液质量关系分析[J];国际检验医学杂志;2012年17期

10 黄建喜;彭陈岑;阿周存;;无精症少弱精症与生精障碍的研究进展[J];中国实用医药;2010年16期

本文编号：2827007