一株鼠抗人CD36单克隆抗体的制备及应用

发布时间：2020-10-20 21:41

　　 目的本研究通过已建立的稳定表达人血小板CD36的HEK293T细胞系,制备鼠源的抗人CD36单克隆抗体并进行特性鉴定。方法利用已经建立的稳定表达人血小板CD36的HEK293T细胞系对CD36(-/-)C57小鼠进行免疫,取脾脏与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选出阳性克隆。纯化单克隆抗体后,利用Western blot检测抗体结合活性。利用小鼠IgG类/单抗亚型鉴定试剂鉴定单克隆抗体的抗体亚型。通过流式细胞检测和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测(MAIPA)鉴定其诊断应用价值。结果经筛选后得到一株杂交瘤细胞,抗体亚型为IgG2a,轻链为κ链,Western blot试验表明该单克隆抗体特异性识别人血小板CD36抗原。MAIPA结果显示,与商业化单克隆抗体FA6-152相比,该单克隆抗体灵敏度更高。结论成功制备了一种鼠抗人CD36单克隆抗体,为临床鉴定CD36抗体,筛选CD36阴性献血员提供了新的工具,也为今后进一步研究CD36在血液免疫疾病中作用机制提供了实验基础。
【部分图文】：

单克隆抗体亚型鉴定结果图

人血小板裂解液与单克隆抗体western blot鉴定结果

2.5 人血小板CD36表达流式细胞检测由血小板流式细胞鉴定结果可知,此单克隆抗体可以特异性识别人血小板CD36蛋白的表达情况,可以用于临床CD36表达缺失献血员的筛选。
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本文编号：2849185