Mfn2调控氯化锰诱导的HE1-OC1细胞氧化应激、增殖和凋亡

发布时间：2020-10-22 02:23

　　 目的探讨线粒体融合蛋白2(Mfn2)在氯化锰(MnCl2)诱导的耳蜗毛细胞(HE1-OC1)氧化应激、增殖和凋亡中的作用机制。方法采用不同浓度(0、1、3、5、10μmol/L)的MnCl2染毒培养的HEI-OC1细胞,建立锰中毒细胞模型;MnCl2染毒培养HEI-OC1细胞同时加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)或si-Mfn2干扰细胞中Mfn2蛋白表达,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖;Western blot检测细胞中总Caspase-3、总Caspase-9、Mfn2蛋白表达水平;流式检测细胞中活性氧(ROS)、细胞凋亡。结果与0μmol/L MnCl2组比较,3、5、10μmol/L MnCl2染毒培养显著抑制HEI-OC1细胞的增殖、促进细胞中活性氧的产生、总Caspase-3、总Caspase-9、Mfn2蛋白表达以及细胞凋亡,并呈剂量依赖性。与5μmol/L MnCl2染毒培养组比较,干扰Mfn2表达组和NAC处理组细胞的增殖能力显著增强,而细胞中活性氧的含量,总Caspase-3、总Caspase-9蛋白表达水平以及细胞凋亡比例均显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论干扰Mfn2蛋白表达可以减轻MnCl2对HEI-OC1细胞产生氧化应激、细胞增殖抑制以及凋亡促进作用。
【部分图文】：

与0μmol/L MnCl2组比较，1μmol/L MnCl2染毒培养组HEI-OC1细胞中总Caspase-3、总Caspase-9、Mfn2蛋白相对表达差异无统计学意义（P>0.05）；而3、5、10μmol/L MnCl2染毒培养组HEI-OC1细胞中总Caspase-3、总Caspase-9、Mfn2蛋白相对表达均显著增加，差异有统计学意义（P<0.05），并呈剂量依赖性，MnCl2浓度越高，蛋白相对表达增加越显著，见图3。图2 不同浓度的MnCl2对HEI-OC1细胞中ROS相对含量的影响

不同浓度的MnCl2对HEI-OC1细胞中ROS相对含量的影响

上述实验结果表明，5μmol/L MnCl2可以显著抑制HEI-OC1细胞增殖，促进细胞中活性氧的产生以及Mfn2蛋白相对表达。因此，选用5μmol/L进行后续实验。与5μmol/L MnCl2染毒培养组比较，培养48、72 h后，MnCl2+si-Mfn2组和MnCl2+NAC组细胞增殖能力显著增强，差异有统计学意义（P<0.05）；但MnCl2+siMfn2组细胞增殖能力仍低于MnCl2+NAC组，差异有统计学意义（P<0.05），见图5。2.6 干扰Mfn2蛋白表达和NAC处理对MnCl2染毒培养的HEI-OC1细胞中ROS相对含量的影响
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本文编号：2850958