19F型肺炎链球菌菌种的复壮及其荚膜多糖纯化工艺的优化

发布时间：2020-10-23 21:56

　　 目的开发复壮肺炎链球菌19F型(Sreptococcus pneumoniae serotype 19F,简称PN19F)菌种的方法,并优化其荚膜多糖的纯化工艺。方法配制PN19F菌种用液体扩增培养基和固体选择培养基,筛选出荚膜较厚的单菌落,比较复壮前后PN19F菌种的发酵培养情况、纯化后多糖收获量及多糖质量;将发酵液裂解后分别酸沉淀8、24和48 h,并经100 KD超滤纯化,再分别用乙醇法和冻干法制备精制多糖,比较其多糖收获量、组分检定结果、抗原活性、核磁共振图谱。结果两种培养基复壮前后的PN19F菌种,发酵收获菌液A_(600)值及培养时间变化不大。纯化后多糖收获量分别为0. 2和0. 6 g/L,即复壮后多糖收率提高了195%。酸沉淀8、24 h后纯化的多糖质量合格,且24 h较8 h多糖收率高约38%,酸沉淀时间达48 h时,产率无明显变化,但多糖质量不合格。乙醇法和冻干法制备的精制多糖各项指标均合格,且无明显差异。结论应用制备的两种培养基复壮的PN19F菌种,可明显提高荚膜多糖产量。PN19F菌种的酸沉淀时间不超过24 h,乙醇法和冻干法均可用于精制多糖制备。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌种
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 扩增培养基及选择培养基的制备
    1.4 PN19F菌种单菌落的复壮
    1.5 复壮前后菌种传代及培养的比较
    1.6 荚膜多糖的提取
        1.6.1 粗制多糖的制备
        1.6.2 精制多糖的制备
    1.7 荚膜多糖纯化工艺的优化
        1.7.1 酸沉淀时间的优化
        1.7.2 乙醇法和冻干法制备精糖的比较
        1.7.3 纯化方法的应用
    1.8 精糖的检定
2 结果
    2.1 PN19F菌种复壮前后的罐培养及荚膜多糖生成情况
    2.2 荚膜多糖纯化工艺的优化
        2.2.1 不同酸沉淀时间及精糖制备方法制备的精糖质量比较
        2.2.2 不同纯化工艺对纯化多糖抗原活性的影响
        2.2.3 乙醇法和冻干法对纯化多糖结构的影响
        2.2.4 酸沉淀时间对比实验的推广应用情况
    2.3 PN19F精糖纯化工艺
3 讨论

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本文编号：2853589