DNAJB8在小鼠睾丸生殖细胞中的表达定位

发布时间：2020-10-26 13:30

　　 目的:探究DNAJB8[DnaJ heat shock protein family(HSP40)member B8]在小鼠精子发生过程中的表达模式。方法:分别采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测小鼠各脏器、不同发育时期睾丸组织以及不同生精细胞DNAJB8的mRNA转录和蛋白表达量;免疫荧光检测DNAJB8在生精细胞中的表达定位。结果:DNAJB8基因在睾丸组织中特异表达,从小鼠出生后21 d(P21)即圆形精子阶段开始DNAJB8 mRNA保持较高的表达,而DNAJB8蛋白在精子变形晚期出生后35 d(P35)才开始表达。DNAJB8蛋白主要定位在晚期精子细胞及精子鞭毛中段。结论:DNAJB8可能参与小鼠精子变形晚期的发育过程。
【部分图文】：

为了进一步验证DNAJB8抗体的特异性，利用Western blot分别检测Dnajb8+/+和Dnajb8-/-小鼠睾丸、精子中的DNAJB8蛋白（26 kDa）的表达。Westernblot实验显示，Dnajb8+/+小鼠睾丸、精子蛋白中有目的条带（26 kDa）表达，而Dnajb8-/-小鼠睾丸、精子中无目的条带表达（图2），说明制备的DNAJB8抗体特异性结合DNAJB8蛋白。2.3 DNAJB8 m RNA和蛋白高度表达于减数分裂后的生精细胞

首先通过qRT-PCR检测DNAJB8 mRNA在睾丸组织中特异表达（图3A）。随后选取出生后不同发育时间点的野生型小鼠睾丸组织，即P7（主要为精原细胞）、P14（出现早期精母细胞）、P21（发育到粗线期精母细胞）、P28（生精管腔出现早期圆形精子）、P35（第1波生精波结束）、P60（成熟精子），同样采用qRT-PCR检测，发现精原和早期精母细胞几乎检测不到DNAJB8 mRNA表达，从P21开始DNAJB8 mRNA保持较高的表达水平，成年达到最高（图3B）。为了明确DNAJB8基因在睾丸不同生殖细胞中的表达情况，对各级生精细胞和支持细胞进行DNAJB8 mRNA水平检测，发现在支持细胞（sertoli,SE）和精原细胞（spermatogonia,SG）中几乎没有DNAJB8表达，粗线期精母细胞（pachytene spermatocytes,PS）阶段DNAJB8 mRNA出现微弱上升，圆形精子（round sper-matid,RS）阶段明显升高，长形精子（elongated sper-matid,ES）阶段达到顶峰，随后在附睾尾成熟精子（sperm,SP）里出现极微弱的表达（图3C）。随后，利用Western blot进一步验证DNAJB8蛋白在睾丸组织中的特异表达（图3D）。检测不同年龄段的小鼠睾丸组织，发现DNAJB8蛋白在出生后第35天（P35）的小鼠中开始表达（图3E），明确DNAJB8蛋白在精子变形晚期ES阶段才开始表达（图3F）。图3 DNAJB8高表达于小鼠雄性生殖细胞

DNAJB8高表达于小鼠雄性生殖细胞
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