PTEN基因不同表达黑色素瘤模型小鼠T淋巴细胞亚群检测及意义

发布时间：2020-10-29 07:51

　　 目的通过检测PTEN基因不同表达黑色素瘤模型小鼠T淋巴细胞亚群的比例及数量变化,探索PTEN在黑色素瘤免疫逃逸中的机制。方法将72只同系C57BL/6小鼠随机分为三组,每组24只:A组注入0.2ml的RPMI-1640培养液;B组注入0.2ml浓度为4×10~6/ml的(PTEN~(+/+)-B16F10);C组注入0.2ml浓度为4×10~6/ml的(PTEN~(-/-)-B16F10)。接种后第7日开始每隔5天每组选6只小鼠制备脾脏单细胞悬液,分析CD3~+T、CD4~+T、CD8~+T相对数量及CD28~+/CD8~+的比例。结果 A组CD3~+T、CD4~+T在D7、D12、D17组内比较无差异,分别与D22比较差异有显著性。CD8~+T、CD28~+/CD8~+比例及数量基本平稳。B组、C组各时间点组内比较差异有显著性。B组下降幅度分别为:79.8%、82.6%、65.37%、58.69%。C组下降幅度分别为:89.62%、89.24%、84.85%、70.53%。组间比较D7、D12,C组B组无差异,D17、D22,C组B组差异有显著性。结论 PTEN基因缺失表达促进了黑色素肿瘤的生长,通过降低小鼠体内T细胞亚群的相对数量,降低了机体的抗肿瘤能力,参与黑色素瘤对机体的免疫逃逸,从而促进了黑色素瘤的发生及发展。
【部分图文】：

图1 倒置荧光显微镜下观察PTEN+/+-B16F10细胞（×100)免疫细胞表面分子染色：接种肿瘤细胞第7天（D7）开始，每隔5天，随机选取A、B、C组各6只小鼠。10%水合氯醛腹腔注射麻醉，麻醉剂量为0.3ml/100g体重，麻醉起效后处死，设计腹腔切口，无菌分离脾脏，EP管中剪碎，研磨，冲洗，收集细胞，红细胞裂解液裂解红细胞2分钟，1200r/min离心10min后弃去上清，重悬，计数。准备18支流式管，分3组，每组6支，对应加入细胞，数量约1×107个，体积100微升，将CD3、CD4、CD8、CD28抗体进行免疫标记反应，避光染色30min。细胞染色缓冲液离心洗涤2次，1000r/min,10min，充分混匀、避光30min,PBS重悬100～200微升，操作均在4℃冰盒上进行。

荷瘤小鼠PTEN的表达

建立PTEN不同表达的荷瘤小鼠模型：将PTEN+/+-B16F10,PTEN-/--B16F10细胞（图1、2）分别皮下接种同系C57BL小鼠，实验动物随机分为三组（A=24;B=25;C=25):A组注入0.2ml的RPMI-1640培养液；B组注入0.2ml浓度为4×106/ml的（PTEN+/+-B16F10);C组注入0.2ml浓度为4×106/ml的（PTEN-/--B16F10）。模型建立成功的标准：B组、C组小鼠背部可见直径约为5mm大小黑结节，突出皮肤表面。分别B、C组各取一只动物，取肿瘤组织免疫印迹法检测PTEN表达情况。图2 倒置荧光显微镜下观察PTEN-/--B16F10细胞（×100)
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本文编号：2860603