抗结核新型化合物的筛

发布时间：2020-10-29 23:21

　　 结核病(Tuberculosis, TB)是全球危害最大的传染病之一。耐药TB的出现及TB与艾滋病病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)共感染使人类对抗TB新药的需求更为迫切。然而传统的抗TB药物研发模式所需周期长、成本高,在长达40多年的时间里,没有抗TB新药诞生。本实验利用新型的抗TB药物筛选模型,成功的筛选到一种化合物(5k),在体内和体外的评价中都表现出良好的杀菌活性。利用该模型,可以在体内外连续检测同一样品,实验过程中不需要添加任何底物,仅需3-5天便可以对药物活性进行快速评价,灵敏度高,重复性强。在活性检测中：使用无抗性的自主发光的H37Ra (Selectable Marker-free Autoluminent Mycobacterium tuberculosis H37Ra, UAIRa)对一系列化合物进行初筛,筛选出包括5k在内的数十个具有体外杀菌活性的新型化合物；用无抗性自主发光的H37Rv (Selectable Marker-free Autoluminent Mycobacterium tuberculosis H37Rv, UAlRv)对这些化合物的杀菌活性做进一步验证,发现5k的体外杀菌效果较好；并且对于临床耐药菌株,5k也有较好的杀菌活性。在体内对于药物活性的检测中,使用不同剂量的5k对感染UAIRa的BALB/c小鼠进行治疗,发现5k在体内也表现出较强的杀菌效果,其杀菌效果与药物剂量呈正相关性,并且没有表现出体内毒性。初步的体内评价表明5k有希望成为抗TB新药。自人类首次发现艾滋病以来,科研人员一直致力于研发一种安全有效的HIV疫苗。科研人员经过30多年潜心研究,提出HIV疫苗需要诱发机体多重免疫反应。这样,疫苗诱导产生的抗体可以在病毒感染时中和部分病毒,其后以细胞免疫应答为主的免疫反应能够清除被病毒感染的细胞,从而降低HIV载量,并减少HIV的传播效率,达到预防与治疗的双重目的。近年来,由于性传播途径成为HIV传播的主要方式,所以能够诱发机体粘膜免疫反应的分枝杆菌疫苗载体在疫苗研发中越来越受到重视。将HIV-1的Env抗原展示在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis, Msmeg)表面,构建HIV疫苗,检测发现,该疫苗可以诱发机体长期的粘膜免疫反应,并且抗原表达在表面的免疫效果好于抗原表达在胞内。对HⅣ患者体内的免疫应答和病毒载量进行比较,可以发现只有当针对Gag的反应更强时,病毒载量才会下降。基于以上成果,本实验选择了三种不同载体蛋白的表面展示系统,在新型的无任何毒力的Msmeg疫苗载体的表面展示SIV Gag抗原,构建重组菌株。
【学位单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R392
【部分图文】：

图１．１彩色扫描电镜下的结核分枝杆菌形态（来源于Ｐｕｂｌｉｃ??Ｈｅａｌｔｈ?Ｉｍａｇｅ?Ｌｉｂｒａｒｙ）。??ｕｒｅ?１．１?Ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?ｏｆ?Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ?ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＰｕｂｌｉｃ?Ｈｅａｌｔｈ?Ｉｍａｇｅ?Ｌｉｂｒａｒｙ）．??致病机制??人体多种器官，如骨豁、淋巴结、脑膜、肺部等，其中以占７０％。侵染机体后会被机体的免疫系统大量清除。Ｍｔｂ会被巨唾细胞表面受体识别，通过内吞作用进入巨ｆｔ定数量的Ｍｔｂ可以阻断吞嗟体与溶酶体的融合，从而在异性免疫阶段，Ｔｈｌ辅助细胞会激活巨哩细胞清除胞内量Ｍｔｂ可以通过降低自身代谢强度进入潜伏状态，而活潜伏状态的ＭＡ，这些特殊状态的Ｍｔｂ最终在体内形成潜

１．２．２?ＨＩＶ的生物学特性??ＨＩＶ分为两种：ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２。其中，ＨＩＶ－１又可以分为４种亚群：Ｍ（Ｍａｊｏｒ）??ｇｒｏｕｐ、Ｎ（Ｎｏｎ－Ｍ，?Ｎｏｎ－０）?ｇｒｏｕｐ、Ｏ（Ｏｕｔｌｉｅｒ）?ｇｒｏｕｐ?和?Ｐ（Ｐｅｎｄｉｎｇ?ｔｈｅ?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ??Ｆｕｒｔｈｅｒ?Ｈｕｍａｎ?Ｃａｓｅｓ）?ｇｒｏｕｐ。其中的Ｍ?ｇｒｏｕｐ病毒是最主要的亚群，约占总感染??数的９９．６％。而Ｎ?ｇｒｏｕｐ及０?ｇｒｏｕｐ则相当少见，多见于中西非，美国及欧洲则??有少数案例，亚洲尚未发现。Ｐ?ｇｒｏｕｐ全球仅有２个案例报道。Ｈ［Ｖ－２目前仅流??行于西非，其毒性与传染性均低于ＨＩＶ－１。??ＨＩＶ大致呈球形，直径约１２０ｎｍ，其基因组为两条相同的正链ＲＮＡ单链，??每条单链长约９．５ｋｂ。ＨＩＶ基因可分为两类：结构基因（Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?Ｇｅｎｅｓ）和非??结构基因（Ｎｏｎ－Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?Ｇｅｎｅｓ）。其中结构基因包括：Ｇａｇ，／Ｗ和￡ｗｖ；非结??构基因包括?ｉＶｅ／，Ｒｅｖ，?Ｔａｔ，?Ｖｉｆ，?Ｖｐｒ，?Ｆｐｗ?或?Ｆｐｊｃ?基因。??

故荆樱桑郑牐牵幔缈乖?闹刈槌芄穹种Ω司?墓菇ǎ崳?检测小鼠胸部的ＲＬＵ，感染后第七天（ｄａｙ６）检测每只小鼠胸部的ＲＬＵ后，实??验结束。本次实验同样使用ＲＩＦ作为阳性对照组。５ｋ体内治疗的效果如图２．２??Ａ?Ｂ?１．２?丨?？?ｖｅｈｉｃｌｅ??６?Ｉ?Ｉ?Ｊ?５ｋ?４?ｍｇ／ｋｇ?ｑｄ??０?ｋ?ｏ?＊?＾?＼?—＾５ｋ２０?ｍｇ／ｋｇｑｄ??会?／?＼ｖ?Ｔ?＾?‘?＼?一？￣?５ｋ?１００?ｍｇ／ｋｇ?ｑｄ??ｇ?４?／?会?０．８?－?Ｖ?■?ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ?４０ｍ２／ｋａ?ｑｄ??１：１?／?ｎ?ｉ：：：??１?１???１０?．２?：??０?ｇ?＇４?－－?０?Ｊ？?Ｊ，??０?２?４?６?（ｄａｙｓ）?０?２?４?６?（ｄａｙｓ）??图２．１５ｋ体内治疗效果图。??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｔｈｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?５ｋ?ｉｎ?ｌｉｖｅ?ｍｏｕｓｅ?ｍｏｄｅｌ．??图２．ＫＡ）表现的是不同剂量的５ｋ持续给药６天对于感染ＵＡｌＲａ的ＢＡＬＢ／ｃ??小鼠的治疗效果。图中的横坐标代表天数，纵坐标代表的是治疗后每天测得的小??鼠胸部ＲＬＵ值与未治疗时（ｄａｙＯ）小鼠胸部ＲＬＵ值的比值。图中可以看出随着??持续的治疗小鼠胸部ＲＬＵ比值的变化，其中蓝线表示阴性对照组，绿线表示５ｋ??剂量为４ｍｇ／ｋｇ的治疗组，紫线表示５ｋ剂量为２０?ｍｇ／ｋｇ的治疗组，橘黄线表示??５１ｃ剂量为ｌＯＯｍｇ／ｋｇ的治疗组，红线表示利福平治疗组。（Ｂ）为（Ａ）中红色方??框区域的放大效果图。??由图２．１所示，未治疗组小鼠体内的ＲＬＵ比值从ｄａｙＯ到ｄａｙ２有明显的增??长
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本文编号：2861615