一种改进的小脑颗粒神经元原代培养方法及其性质鉴定

发布时间：2020-11-04 06:13

　　 目的在已报导的原代小脑颗粒细胞(cerebellar granule neurons,CGNs)的提取培养方法基础上进行改进,以获得较少杂质、更高存活率及更高纯度的CGNs,为后续体外研究做准备。方法将Tryple Express消化液消化及前后两次离心后得到的单细胞悬液,经台盼蓝活细胞计数后接种在预先用多聚赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)包被的培养板中。接种20～24 h后,加入10μmol·L-1的阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C),以及从d 4开始每隔3天加入终浓度5 mmol·L-1的Glucose。借助荧光显微镜及神经元特异性标志物微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)对CGNs细胞进行形态观察及纯度鉴定。结果与原有的胰酶提取方法相比,改进后的CGNs提取方法细胞生长状态良好、突触发育完善、细胞碎片等杂质含量较少,并具有较高存活率及纯度(97%)。结论该方法简便可行,结果稳定,可以为体外神经元的生长发育、轴突再生和神经系统疾病的研究提供有力支持。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养板的包被
        1.2.2 培养操作液的配制
        1.2.3 小脑颗粒神经元的提取及原代培养方法
        1.2.4 细胞存活率计数
        1.2.5 CGNs的形态学观察
        1.2.6 CGNs的免疫组织化学鉴定
        1.2.7 星形胶质细胞的形态观察
        1.2.8 统计方法
2 结果
    2.1 CGNs的细胞存活率
    2.2 CGNs提取方法改进前后收获的单细胞数量比较
    2.3 CGNs神经元生长形态变化
    2.4 CGNs的纯度鉴定
3 讨论

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本文编号：2869740