鼠疫耶尔森菌气溶胶发生与采样过程的生物活性损伤研究

发布时间：2020-11-05 02:09

　　 目的研究鼠疫耶尔森菌气溶胶发生与采样过程中的生物活性损伤程度,探索减轻其损伤的方法。方法采用液体撞击式采样器对鼠疫耶尔森菌和粘质沙雷菌气溶胶进行采样和培养计数的方法,观察气溶胶发生与级联冲击采样测试过程中的生物活性损伤情况,以及不同采样液对生物活性的保护效果。结果鼠疫耶尔森菌气溶胶经AGI-10采样器采样10 min的生物活性损伤为98.63%,经发生器发生及AGI-10采样器采样10 min的生物活性损伤为98.80%,其采样和气溶胶发生采样过程生物活性损伤依次是粘质沙雷菌的160.36%和116.62%。PBS采样液在5 min采样时基本没有生物损伤,采样液加入吐温80和橄榄油可对30 min采样的鼠疫耶尔森菌活性提供有效的保护。结论鼠疫耶尔森菌在气溶胶发生与采样过程中生物活性损伤较大,其采样活菌数需进行校正,其气溶胶发生与采样方法需进行优化。该菌液体冲击式采样的优选采样介质为PBS+0.01%吐温80+0.005%橄榄油。
【部分图文】：

将5个(编号Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ)AGI-10采样器中，在采样器I中倒入菌液10 m L(菌液理论浓度均为106cfu/m L)，其余4个采样器中各倒入10 m L无菌氯化钠采样液，然后连接带滤膜的过滤器及采样泵(图1)。启动抽气泵采样10 min(采样流量为6 L/min)后关闭所有气路。测试结束后对各级采样器内采样液体积进行测量，采样液涂布培养基平板培养计数检测浓度。以公式1计算的细菌存活率，公式2计算级联采样后的鼠疫耶尔森菌相对粘质沙雷菌的生物活性损伤率，以公式3计算第一级采样器(I)的细菌气溶胶逃逸率。(公式中:CA为采样前采样液I浓度(cfu/m L),VI为采样前采样液I体积(m L),CA’为采样后采样液I浓度(cfu/m L)…C"V为采样后采样液V浓度(cfu/m L),V"A为采样后采样液I体积(m L)…V"V为采样后采样液V体积(m L)。Sy为鼠疫耶尔森菌存活率，Ss为粘质沙雷菌存活率。)

试验比较了鼠疫耶尔森菌在6种采样液中进行5 min或30 min的液体冲击式采样后，其生物活性的保持程度即校正存活率(图2)。3种采样液对于鼠疫耶尔森菌的保护效果有明显差异(P<0.05)，其中BHI(脑心浸液丙酮肉汤)作为采样液为鼠疫耶尔森菌提供营养导致采样样本浓度偏高，生理盐水(Saline)作为采样液有明显的生物损伤导致采样样本浓度偏低，PBS(磷酸盐缓冲液)作为采样液基本没有生物损伤;30 min采样的细菌活性损伤明显高于5 min采样(P<0.05)。随着采样时间延长鼠疫耶尔森菌活性会不断下降;吐温80和橄榄油等添加剂的加入可对长时间采样(30 min)的鼠疫耶尔森菌活性提供有效的保护(P<0.05)，同时也可以抑制鼠疫耶尔森菌在BHI中的增殖(P<0.05)。结果提示，在进行鼠疫耶尔森菌的气溶胶采样试验中应选择PBS作为采样液，若长时间采样样本可在采样液中加入100 mg/L吐温80和50 mg/L橄榄油。3 讨论
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