小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中Klotho对Th17细胞分化的影响

发布时间：2020-11-07 07:18

　　 目的本研究目的是利用实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型(多发性硬化症实验动物模型),阐明在多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)发病过程中,Klotho对Th17细胞分化的作用。方法将8~10周的C57BL/6小鼠平均分成三组:EAE组(实验性自身免疫性脑脊髓炎模型组),EAE+KL(L)组和EAE+KL(H)组。造模第30天处死小鼠后,用FACS检测辅助性T细胞(Th);ELISA方法检测分化相关细胞因子(IL-6、IL-23、IL-10、IL-4等);蛋白免疫印迹法(western blot)用来检测Th17相关调节因子及转录因子(PI3K、NF-κB、RORγT);免疫荧光染色用来检测蛋白分布及共定位(KL、IL-17和CD68)。结果比较不同浓度EAE+KL组和EAE组发病时间和临床评分发现,两个EAE+KL组发病时间较EAE组明显延迟,临床评分明显降低。比较两种浓度EAE+KL组之间发病时间、临床评分没有明显差别。FACS检测Th细胞分化情况,体内实验显示,EAE+KL组较EAE组由Th1分泌的IFN-γ、Th17分泌的IL-17表达量明显降低。脾细胞体外培养实验表明,EAE+KL组较EAE组由Th1分泌的IFN-γ、Th17分泌的IL-17表达量明显降低,由Treg分泌的Foxp3表达量增高。ELISA方法检测分化相关细胞因子显示,EAE+KL组炎症因子(IL-23、IL-6、IL-17及IFN-γ)较EAE组明显降低,IL-10和IL-4明显升高。蛋白免疫印迹显示,EAE+KL组PI3K、NF-κB和RORγT较EAE组明显降低。双重免疫荧光染色显示,EAE+KL组较EAE组IL-17单阳性细胞数减少,KL单阳性细胞数增多,两组双阳性细胞数没有差别。EAE+KL组较EAE组CD68单阳性细胞数明显减少,KL单阳性细胞数、CD68和KL双阳性细胞数增多。结论在脾脏,KL通过调控PI3K/NF-κB信号转导通路进而对Th17细胞的分化起到一定的抑制作用,KL也可以调控巨噬细胞的活性从而在一定程度上抑制Th0向Th17细胞的分化辅助作用。此结论可为多发性硬化症的研究提供理论依据。
【学位单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R744.51;R-332
【部分图文】：

EAE+KL(L)组和EAE+KL(H)组最高临床评分较EAE组明显降低，结果具有统计学意义，P<0.05；EAE+KL(H)组最高临床评分较EAE+KL(L)组也降低，P<0.05（图1-2所示）。图1 小鼠EAE动物模型发病的临床评分(*P<0.05)

18a b图2 小鼠发病时间和临床评分比较注：图a为各组小鼠开始发病时间，EAE+KL(L)组和EAE+KL(H)组（*P<0.05）。图b为各组小鼠最高临床评分EAE+KL(L)组和EAE+KL(H)组（*P<0.05）。（二）EAE 小鼠的健康率分析为分析小鼠临床发病率情况，我们绘制了各组小鼠健康率的折线图（图3），以反映小鼠的发病情况：我们发现，EAE组从免疫当天（0天）到免疫第6天，发病率为0，从第7天开始，发病率逐渐上升，到第11天发病率为100%。即EAE组所有小鼠均发病。EAE+KL(L)组和EAE+KL(H)组从免疫当天（0天）到第10天左右发病率都为0

小鼠最高临床评分EAE+KL(L)组和EAE+KL(H)组（*P<0.05）。（二）EAE 小鼠的健康率分析为分析小鼠临床发病率情况，我们绘制了各组小鼠健康率的折线图（图3），以反映小鼠的发病情况：我们发现，EAE组从免疫当天（0天）到免疫第6天，发病率为0，从第7天开始，发病率逐渐上升，到第11天发病率为100%。即EAE组所有小鼠均发病。EAE+KL(L)组和EAE+KL(H)组从免疫当天（0天）到第10天左右发病率都为0，即开始发病时间大体相同，随时间推移，发病率上升，EAE+KL(L)组和EAE+KL(H)组约到第13天发病率为100%，即全部发病。图3 各组小鼠健康率的分析注： EAE组小鼠从第7天开始发病
【参考文献】

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1 何永利;王咏龙;蔡志友;晏勇;;BACE1与β-淀粉样蛋白在快速老化大鼠脑组织中的表达及行为学相关性研究[J];广东医学院学报;2015年01期

本文编号：2873621