背景刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种寄生于人和动物有核细胞内的原虫,近年来研究发现弓形虫感染会导致宿主脑源性神经营养因子(BDNF)、颤蛋白(Reelin)和谷氨酸脱羧酶67(GAD67)等蛋白的表达异常,从而影响宿主脑认知功能,此外,还与精神障碍及行为、性格发生改变相关。也有研究表示弓形虫感染能改变动物性激素水平,而性激素与BDNF、Reelin和GAD67等蛋白的表达密切相关。因此,为了详细探讨性激素异常与感染弓形虫叠加后对脑认知功能的影响。我们分别摘除雌、雄小鼠双侧卵巢和睾丸,建立去势动物模型(模拟性激素下降或缺失人群),研究性激素下降或缺失状态下感染弓形虫后脑内BDNF、Reelin和GAD67等与学习、记忆、行为相关分子的表达状况,。目的探讨去势小鼠感染弓形虫后脑内BDNF、Reelin及GAD67等相关分子的表达情况。方法选用10周龄的NIH小鼠80只(雄小鼠40只,雌小鼠40只),将雌性小鼠随机分为正常对照组(F1,10只),去势组(F2,10只),弓形虫感染组(F3,10只),去势+弓形虫感染组(F4,10只);雄性小鼠分为正常对照组(M1,10只),去势组(M2,10只),弓形虫感染组(M3,10只),去势+弓形虫感染组(M4,10只)。无菌手术摘除雌性小鼠双侧卵巢和雄性小鼠双侧睾丸,角细胞涂片及血清雌激素水平验证雌性小鼠去势效果;肉眼观测及血清雄激素水平验证雄性小鼠去势效果。1周以后对F3、M3、F4、M4组每只小鼠以灌胃方式感染弓形虫PRU株包囊4-5个,60天后采用抗弓形虫IgG抗体ELISA试剂盒对其血清进行弓形虫特异性IgG抗体的检测。Morris水迷宫定位定航与空间探索实验检测小鼠学习及记忆能力的改变。采用ELISA试剂盒定量检测小鼠外周血雌二醇、睾酮和脑组织中BDNF、Reelin和GAD67的蛋白表达水平,提取小鼠脑组织RNA并反转录为cDNA,应用real-time PCR方法检测BDNF IV、BDNF IX、BDNF T、Reelin和GAD67的mRNA表达水平。结果1、60天后感染组和去势+感染组小鼠的弓形虫特异性IgG抗体检测结果为:感染阳性率为100%,确认弓形虫感染成功。2、Morris水迷宫和性激素检测结果:雌性小鼠平均逃避潜伏期去势组连续五天长于正常对照组(P0.05),感染组第一、第二天无明显差异(P0.05),第三、第四、第五天短于正常对照组(P0.05),去势+感染组短于去势组(P0.05),外周血雌二醇水平去势组低于正常对照组(P0.05),感染组高于正常对照组(P0.05),去势+感染组高于去势组(P0.05);雄性小鼠平均逃避潜伏期去势组连续五天长于正常对照组(P0.05),感染组短于正常对照组(P0.05),去势+感染组小鼠长于去势组(P0.05),睾酮水平去势组低于正常对照组(P0.05),感染组高于正常对照组(P0.05),去势+感染组高于去势组(P0.05)。3、脑组织BDNF、Reelin、GAD67蛋白及其mRNA表达结果为:雌性小鼠BDNF去势组与正常对照组差异不显著(P0.05),感染组高于正常对照组(P0.05),去势+感染组高于去势组(P0.05);BDNF IVmRNA表达去势组高于正常对照组(P0.05),感染组低于正常对照组(P0.05),去势+感染组低于去势组(P0.05);BDNF IX mRNA表达去势组低于正常对照组(P0.05),感染组与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05),去势+感染组与去势组比较差异无统计学意义(P0.05);BDNF T mRNA表达去势组低于正常对照组(P0.05),感染组低于正常对照组(P0.05),去势+感染组低于去势组(P0.05);Reelin蛋白去势组与正常对照组差异不显著(P0.05),感染组高于正常对照组(P0.05),去势+感染组和去势组差异不显著(P0.05);Reelin mRNA表达去势组低于正常对照组(P0.05),感染组低于正常对照组(P0.05),去势+感染组低于去势组(P0.05);GAD67去势组低于正常对照组(P0.05),感染组与正常对照组差异不显著(P0.05),去势+感染组与去势组差异不显著(P0.05);GAD67 mRNA表达去势组低于正常对照组(P0.05),感染组高于正常对照组(P0.05),去势+感染组低于去势组(P0.05)。4、雄性小鼠结果:BDNF去势组与正常对照组差异不显著(P0.05),感染组高于正常对照组(P0.05),去势+感染组高于去势组(P0.05);BDNF IV mRNA表达去势组高于正常对照组(P0.05),感染组和正常对照组差异不显著(P0.05),去势+感染组低于去势组(P0.05);BDNF IX mRNA表达去势组高于正常对照组(P0.05),感染组低于正常对照组(P0.05),去势+感染组低于去势组(P0.05);BDNF T mRNA表达去势组低于正常对照组(P0.05),感染组低于正常对照组(P0.05),去势+感染组高于去势组(P0.05);Reelin蛋白去势组与正常对照组差异不显著(P0.05),感染组高于正常对照组(P0.05),去势+感染组高于去势组(P0.05);Reelin mRNA表达去势组低于正常对照组(P0.05),感染组与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05),去势+感染组高于去势组(P0.05);GAD67去势组低于正常对照组(P0.05),感染组高于正常对照组(P0.05),去势+感染组高于去势组(P0.05);GAD67 mRNA表达去势组高于正常对照组(P0.05),感染组低于正常对照组(P0.05),去势+感染组低于去势组(P0.05)。结论性激素水平下降或缺失情况下感染弓形虫后,雌、雄性小鼠外周血性激素水平异常升高,雌性小鼠空间记忆能力升高,雄性小鼠空间记忆能力下降;雌、雄小鼠脑部海马组织BDNF、Reelin、GAD67蛋白及其mRNA表达异常改变。此外,这些蛋白因子在雌性和雄性小鼠表达和分布方面存在一定的差异。
【学位单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R382.5
【部分图文】：
图 2-1 SYBR Green I 染料工作原理图研究表明，每个样品的 CT值（C 代表 Cycle，T 代表 threshold，CT值指样品管的荧光信号达到某一固定阈值的 PCR 反应循环数）与该样品模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，CT值越小。两者关系可用一公式表示：CT=-klogX0+b。△ △ CT相对定量法就是首先计算目的基因 CT值与管家基因 CT值之差△ CT，然后根据公式△ △ CT= △CTUnknown（处理后样本△ CT 值）-△ CTCalibrator（校准样本△ CT 值）计算获得 2-△ △ CT，从而获得目的基因在处理后相对于校准组基因的倍数关系。2.7.5 引物序列引物由上海生工生物工程有限公司合成，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，GADPH）为反应体系内参照，进行相对定量 PCR。引物序列见表 2-1。
去势手术前阴道角细胞涂片（放大倍数400×）
取 F2、F4 组的小鼠，在动情间期连续五天做的，去势手术 1 周后，再连续五天的阴道角细胞涂片无角细胞去势手术是否成功。图 3-1 去势手术前阴道角细胞涂片（放大倍数 400×）
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 孟庆祝;;羊弓形虫病的诊断与防治[J];当代畜禽养殖业;2019年12期
2 金冬辉;;羊弓形虫病的诊治[J];养殖与饲料;2019年06期
3 郭敏;;羊弓形虫病的诊断与防治[J];当代畜牧;2018年29期
4 谢宏权;;如何诊断和治疗猪的弓形虫病[J];兽医导刊;2019年15期
5 谢征;魏松;李永彬;;一例羊弓形虫病的诊断与治疗[J];现代牧业;2019年03期
6 罗潇;张莉;吕艳;李海龙;;我国弓形虫病误诊现状及其研究进展[J];中国病原生物学杂志;2018年05期
7 李秀萍;薛海莹;王刚;金莲军;;青海省湖东种羊场羊弓形虫病流行病学的调查[J];青海畜牧兽医杂志;2017年01期
8 宋玉英;;家兔弓形虫病的防治[J];中国养兔;2017年03期
9 胡小林;;羊弓形虫病的诊断与防治[J];湖南畜牧兽医;2017年05期
10 何彦春;李珊;李旭蓉;钱振波;;甘肃省张掖市动物弓形虫病血清学调查[J];中国动物检疫;2016年03期
相关博士学位论文 前10条
1 潘明;弓形虫致密颗粒和棒状体分泌蛋白的鉴定和功能研究[D];华中农业大学;2019年
2 夏宁波;糖酵解在弓形虫生长发育中的生物学作用[D];华中农业大学;2019年
3 王铭;弓形虫移动联结复合物成员棒状体颈部蛋白4的功能研究[D];东北农业大学;2017年
4 陈小庆;不同基因型弓形虫多组学分析及其对小鼠肝脾代谢组的影响[D];吉林农业大学;2018年
5 王萌;弓形虫感染早期家猫小肠转录组学和蛋白组学研究[D];中国农业科学院;2019年
6 张东超;弓形虫肝素结合蛋白质ROP9、MIC3和SAG2的功能研究及其重组腺病毒的免疫原性分析[D];吉林大学;2019年
7 潘乐;弓形虫Chinese I株BIN3蛋白的生物学特性研究[D];吉林大学;2019年
8 闻慧琴;弓形虫多态性毒力相关效应分子GRA15_Ⅱ/ROP 16_(Ⅰ/Ⅲ)致小鼠不良妊娠结局的研究[D];安徽医科大学;2015年
9 刘卿;弓形虫MIC6/7/8及GRA15互作蛋白的筛选、鉴定及GRA15对宿主细胞信号转导的影响[D];湖南农业大学;2017年
10 韩亚莉;弓形虫扁菱形蛋白酶4和组织蛋白酶C1的免疫学研究[D];山东大学;2018年
相关硕士学位论文 前10条
1 王辉;药用植物抗弓形虫筛选及鸦胆子油活性研究[D];延边大学;2019年
2 李文梅;去势小鼠感染弓形虫后BDNF、Reelin和GAD67表达状况[D];新乡医学院;2019年
3 马群山;弓形虫3种钙依赖蛋白激酶的克隆表达及对小鼠巨噬细胞功能的影响[D];南京农业大学;2017年
4 刘辉;弓形虫表面抗原糖蛋白相关序列SRS47D生物学特性的初步研究[D];中国农业科学院;2019年
5 段倩玉;弓形虫TR基因与ROP18基因缺失株的构建及其生物学功能研究[D];中国农业科学院;2019年
6 白梦捷;弓形虫致密颗粒蛋白基因缺失株的构建及其生物学特性研究[D];中国农业科学院;2019年
7 牛美容;弓形虫RH-ΔTgcsp2虫株的构建及其表型和转录组研究[D];西北农林科技大学;2019年
8 熊乙丁;弓形虫profilin蛋白的原核表达及其抗体对弓形虫增殖影响[D];遵义医科大学;2019年
9 李琦;犬MDCK细胞Irgm4、5、6基因敲除及其抗弓形虫生长作用[D];黑龙江八一农垦大学;2019年
10 陈运通;弓形虫自噬相关蛋白TgATG12促进TgATG8在顶质体外膜定位的分子机制研究[D];中国农业科学院;2019年
本文编号：
2875671
