肥胖对PDGs形态结构及标记物影响的初步研究

发布时间：2020-11-15 23:43

　　 目的:构建高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型和自发形成肥胖的ob-/-、db-/-小鼠模型,在不同肥胖模型中探究肥胖对PDGs形态结构及相关蛋白指标的影响。方法:肥胖小鼠模型构建及分组:HFD组(n=10):通过高脂饮食诱导C57BL/6小鼠3个月构建肥胖小鼠模型;HFD-ctrl组(n=6):选取同期C57BL/6小鼠,普通饮食3个月;OB组(n=8):选取7-8周龄ob-/-小鼠,普通饮食喂养4周;OB-ctrl组(n=6):选取同窝ob-/w小鼠,普通饮食喂养4周;DB组(n=8)选取7-8周龄db-/-小鼠,普通饮食喂养4周;DB-ctrl组(n=6):选取同窝db-/w小鼠,普通饮食喂养4周;每周称重,检测血糖、甘油三酯及总胆固醇;通过HE染色分析小鼠PDGs结构及肥胖对PDGs结构及数量影响;通过免疫组化及特殊染色探究肥胖条件下PDGs中TFF2、MUC5AC表达及Alcian blue染色变化情况。结果:肥胖小鼠体重、血糖、甘油三酯、总胆固醇较对照组明显升高,差异存在统计学意义;胰腺主导管周围存在PDGs结构,与瘦鼠相比,肥胖小鼠的PDGs数量增多;TFF2及Alcian blue染色是PDGs特异性标记,肥胖小鼠PDGs中TFF2表达升高、Alcian blue染色加深,MUC5AC表达阴性。结论:高脂饮食诱导法成功建立肥胖小鼠模型,肥胖促进了PDGs的增殖,导致酸性粘蛋白分泌增加及TFF2表达升高,这可能与胰腺导管损伤修复相关。
【学位单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R589.2;R-332
【部分图文】：

血糖轻度升高，OB 组小鼠血糖中度升高，DB 组小鼠形成糖尿病；图 E:小鼠总胆固醇变化 ，三组肥胖小鼠总胆固醇均较各自瘦鼠组升高，差异显著；图 F:小鼠甘油三酯变化，三组肥胖小鼠总胆固醇均较各自瘦鼠组升高，差异显著;*:P<0.05; **:P<0.001）2.2 胰腺导管周围 PDGs 结构PDGs 结构上呈主胰管芽出的腺体样囊性外突的特殊结构，存在于胰腺近端大导管周围间质内，其内细胞含有丰富粘液性蛋白，TFF2 及 Alcian blue 染色是 PDGs 的特异性标记，PDGs 形态及功能类似于胃肠道上皮组织内干细胞[52]。通过对临近切片分别进行 HE 染色、TFF2 免疫组化及阿利新蓝染色，发现正常小鼠的近端主胰管壁内存在形态上不同于胰腺导管的特殊结构，该结构内细胞呈单层矮柱状排列，含有丰富的胞浆，细胞核呈圆形，位于细胞基底部，同时发现该特殊结构内 TFF2 的表达及 Alcian blue染色阳性，而在胰腺导管内 TFF2 及 Alcian blue 染色阴性。这说明胰腺主导管周围确实存在不同于胰腺导管的特殊结构，PDGs，(图 2)。

图 3：肥胖小鼠和对照组 PDGs 结构数量(图 A：HFD 小鼠组 PDGs 结构,100X；图 B：HFD-ctrl 小鼠组 PDGs 结构 100X；图 C：OB 小鼠组结构，40X；图 D：OB-ctrl 小鼠组 PDGs 结构，40X；图 E：DB 小鼠组 PDGs 结构，40X；图 F：DB小鼠组 PDGs 结构，40X；图 G：图 A 与图 B 中 PDGs 结构数量对比；图 H：图 C 与图 D 中 PDGs 数量对比；图 I：图 E 与图 F 中 PDGs 结构数量对比； 表示 PDGs 结构)2.4 肥胖小鼠 PDGs 中标记物表达变化2.4.1 Alcian blue 染色变化：本实验中发现 HFD-ctrl 组小鼠、OB-ctrl 组小鼠及 DB-ctrl 组小鼠 PDGs 结构内较浅的Alcian blue染色,染色面积较小，而对应的HFD组小鼠、OB小鼠及DB小鼠P结构中 Alcian blue 染色明显增强，且染色面积增大，这说明肥胖能够促进 PDGs 分性粘蛋白（图 4）。C

27图 5：PDGs 结构中 TFF2 表达 A:HFD 小鼠组 PDGs 结构中 TFF2 表达,200X；图 B:HFD-ctrl 小鼠组 PDGs 结构中 TFF2 表00X；图 C:OB 小鼠组 PDGs 结构中 TFF2 表达,200X；图 D:OB-ctrl 小鼠组 PDGs 结构中 TFF,200X;图 E:DB 小鼠组 PDGs 结构中 TFF2 表达,200X 图 F:DB-ctrl 小鼠组 PDGs 结构中 TFF200X）。.3 MUC5AC 表达变化：PDGs 在受到炎性刺激时，发生粘液性化生，表达诸多和化生相关蛋白。通过免，在三组肥胖模型小鼠及各自对照瘦鼠的 PDGs 中 MUC5AC 的表达均呈阴性（图 6明肥胖未能引起 PDGs 发生明显的化生性改变。
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本文编号：2885352