法尼酯X受体激动剂奥贝胆酸抑制脂多糖诱导急性肾损伤过程肾脏氧化应激和炎性反应

发布时间：2020-11-16 11:44

　　 目的:本实验通过使用LPS腹腔注射构建小鼠脓毒血症急性肾损伤动物模型,通过分析多种炎症反应和氧化应激指标,阐明OCA预处理对脓毒血症小鼠急性肾损伤的影响。实验结果可以为脓毒血症急性肾损伤的临床治疗提供参考。方法:将总共48只小鼠随机分成4组,分别为:对照组、OCA组、LPS组、LPS+OCA组。在LPS组中,给小鼠腹腔内注射LPS;在对照组中,使用等剂量的生理盐水代替LPS进行注射;在LPS+OCA组中,分别在LPS注射前的第48小时、24小时和1小时使用OCA经管饲法对小鼠经行预处理。在OCA组中,分别在生理盐水注射前第48小时、24小时和1小时通过管饲法给小鼠施用三剂OCA。分别在注射药物后2小时,8小时和24小时处死小鼠。收集小鼠全肾组织(包括皮质和髓质)及小鼠血清(血液样本于小鼠处死时留取)用于评价肾功能、分析肾脏病理损伤和明确炎性反应及氧化应激的分子指标。结果:OCA预处理激活了小鼠肾脏组织中的FXR信号,OCA预处理减轻了LPS诱导的小鼠急性肾损伤期间的肾功能障碍和病理损伤。首先,OCA预处理减少LPS诱导的小鼠急性肾损伤期间肾脏组织炎症相关细胞因子的产生;经过进一步的实验,我们发现OCA预处理可抑制小鼠肾皮质肾小管上皮细胞NF-κB p65和NF-κB p50亚基的核转位;其次,我们还发现OCA预处理减少了LPS诱导的脓毒血症期间小鼠肾脏组织GSH(谷胱甘肽)的消耗,同时可以减缓肾组织脂质过氧化;抑制肾脏蛋白质的硝化作用;最后我们发现使用OCA预处理可以部分抑制LPS诱导的脓毒血症期间小鼠肾脏组织NADPH氧化酶和i NOS(诱导型一氧化氮合酶)基因的转录。结论:通过实验我们发现OCA可以通过激活肾脏FXR信号进而抑制肾脏炎性反应和氧化应激,最终可以减轻脓毒血症诱导的急性肾损伤。这些结果为FXR作为肾脏炎性反应和氧化应激的重要调节剂提供了证据。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R459.7;R692.5;R-332
【部分图文】：

安徽医科大学硕士学位论文通过使用免疫组织化学法，我们分析了 OCA 预处理对小鼠肾脏组织 FXR 活化的影响。正如预期的结果那样， FXR 阳性细胞主要分布于肾脏近端肾小管上皮细胞，进一步分析我们发现经过 OCA 预处理的小鼠肾组织中 FXR 阳性细胞核的3.结果3.1 OCA 预处理促进小鼠肾脏 FXR 的核转位

20图 2.OCA 预处理减轻 LPS 诱导的小鼠急性肾损伤和肾功能障碍。（A 和 B）评估肾脏组织病理学。（ A）HE 染色显示肾小管扩张（实心箭头），肾小球扩张（空心箭头），细胞质空泡化（箭头）和肾小管上皮细胞的管状刷状缘消失（*）。DCT：远曲小管；PCT：近曲小管;；G：肾小球。显微镜放大倍数：400×。（B）病理学评分用于评估不同组之间肾损伤的程度。（C 和 D）血液指标评估肾功能。（C）血清肌酐；（D）血清 BUN。所有数据均表示为 X±SEM（n = 6）。* P <0.05，** P <0.01。3.3 OCA 预处理抑制 LPS 诱导的小鼠急性肾损伤中的肾细胞凋亡通过使用 TUNEL 染色，我们分析了 OCA 预处理对 LPS 诱导的小鼠肾细胞凋亡的影响。如图 3A 所示，我们在 LPS 注射后 2 小时观察到小鼠肾组织中的大量TUNEL 阳性细胞。进一步分析显示 TUNEL 阳性细胞主要分布在肾皮质肾小管上

图 3.OCA 预处理抑制 LPS 诱导的小鼠急性肾损伤中的肾细胞凋亡。（A）通过 TUNEL 技术检测肾脏细胞凋亡。箭头表示肾皮质肾小管上皮细胞中的 TUNEL +细胞。显微镜放大倍数：400×。（B）评估 TUNEL +细胞在不同组中的百分比。所有数据均表示为 X±SEM（n = 6）。** P <0.01。3.4 OCA 预处理抑制小鼠急性肾损伤中 LPS 诱导的促炎细胞因子和趋化因子使用实时定量 PCR，我们分析了 OCA 预处理对小鼠急性肾损伤时 LPS 诱导的肾炎性细胞因子基因转录的影响。如图 4A-C 所示，肾脏组织 tnf-α，il-6 和 il-1β三种促炎细胞因子的 mRNAs，LPS 注射后 2 小时和 LPS 注射后 8 小时增加显著。虽然 OCA 预处理对 LPS 注射后 2 小时小鼠肾脏炎症细胞因子的基因转录几乎没有影响，但在 LPS 注射后 8 小时，OCA 预处理显著抑制小鼠促炎细胞因子的基因转录（图 4A- C）。我们分析了 OCA 预处理对小鼠肾组织中 LPS 诱导的趋化因子基因转录的影响。如图 4D- F 所示，正如我们预期的那样，在 LPS 注射后 2 小时，肾脏组织 mip-2、kc 和 mcp-1 mRNAs 的表达显著上升，LPS 注射后 8 小时仍然保持高水平。LPS 注射后 8 小时的 OCA 预处理显著抑制小鼠肾组织中 mip-2，kc 和
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本文编号：2886176