乙型肝炎病毒B、C、D基因型AAV-HBV小鼠模型构建与病毒学特征比较

发布时间：2020-12-07 04:21

　　目的建立乙型肝炎病毒（HBV）B、C基因型中国流行株腺相关病毒介导的乙肝病毒（AAV-HBV）小鼠模型,并研究其病毒学变化特征。方法以B、C基因型HBV流行株序列为基础,并参照常用D基因型病毒序列,分别构建出携带1.3×基因组的腺相关病毒载体质粒:p AAV-HBV1.3×（B）、pAAV-HBV1.3×（C）和pAAV-HBV1.3×（D）。通过三质粒共转染方法在293细胞中包装成三种成熟的腺相关病毒载体rAAV-HBV 1.3（B）、rAAV-HBV 1.3（C）与rAAV-HBV1.3（D）。C57BL/J小鼠通过尾静脉注射相同剂量的AAV-HBV病毒载体,在注射后不同时间点,用ELISA方法检测血清中HBsAg和HBeAg表达水平,用荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测小鼠血清中HBV DNA拷贝数。结果新构建B、C基因型两株病毒有更高HBsAg表达水平,B基因型小鼠血清中HBsAg检测值（均值）波动在957.67～2 590.04 IU/mL,C基因型小鼠血清HBsAg波动在725.21～3 195.16 IU/mL,D基因型小鼠血清HBsAg波动在153.4～531.8 I... 

【文章来源】：热带医学杂志. 2020年03期 第297-302+308页

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

B、C、D基因型AAV-HBV小鼠血清中HBsAg表达水平

注射AAV-HBV病毒第7天、第10天、第2周、第3周、第4周、第6周、第8周，各组小鼠均检测到HBeAg表达。由于无HBeAg的定量检测试剂盒，本研究中使用了OD450读值来表示HBeAg的表达水平。B、C、D基因型AAV-HBV小鼠中第2周血清HBeAg表达水平均较第7天显著上升，差异均有统计学意义（P<0.05），见图2A、B、C。比较不同基因型第8周的HBeAg表达水平，各基因型之间差异有统计学意义（P<0.05），见图2D。2.3 B、C、D三种基因型HBV病毒在小鼠中HBV DNA变化特征

HBV病毒有A～J 10个基因型，HBV基因型是影响临床表现的重要因素之一。我国台湾学者发现，在台湾，C基因型与严重肝脏疾病密切相关，B基因型与年轻人中无肝纤维化阶段肝癌发生相关，但是在日本和我国大陆地区B基因型有更好预后，并且很少进展到肝癌阶段[9]。但30多年HBV基础研究历程中，B、C基因型病毒应用较少，而D基因型病毒一直占据研究的中心地位，包括细胞系HepG2.2.15、HepAD38、HepDE19、黑猩猩感染模型、HBV转基因小鼠模型、模拟HBV感染质粒水动力高压注射模型、AAV-HBV小鼠模型[10-19]。我国大陆学者也有使用其它基因型质粒高压注射构建小鼠模型的报道[20-21]，也发现B基因型有与D基因型HBV病毒表现特征不同。我们从临床上分别选择了B、C基因型病毒各1株，构建了AAV-HBV小鼠模型，并在小鼠模型中进行了8周的病毒学指标检测，发现这两株病毒与常用的D基因型病毒有不同的表现特征。本研究成功建立了HBV B、C基因型的中国大陆流行株的AAV-HBV小鼠模型。图4 B、C、D基因型AAV-HBV小鼠血清中HBsAg与HBV DNA比值变化特征


本文编号：2902615