闭合蛋白的胞外环缺失对小鼠TM4细胞紧密连接的影响分析

发布时间：2020-12-09 02:14

　　目的:分析闭合蛋白的2个胞外环结构域在小鼠TM4细胞紧密连接中的功能。方法:利用基因工程的方法,分别或者同时缺失掉闭合蛋白的2个胞外环,将缺失了胞外环3个闭合蛋白基因序列,分别克隆入pcDNA3.1表达载体,再转入TM4细胞。用RT-PCR和Western印迹分析闭合蛋白表达量,用紧密连接的体外细胞模型来分析闭合蛋白的胞外环对紧密连接程度的影响。结果:测序结果表明pcDNA3.1-occludinΔOCC1、pcDNA3.1-occludinΔOCC2和pcDNA3.1-occludinΔOCC1+OCC2表达载体已经构建成功。RT-PCR和Western印迹结果显示3个缺失组闭合蛋白的mRNA和蛋白质的表达量都显著高于对照组。体外紧密连接模型分析结果表明闭合蛋白2个胞外环都能够增加TM4的紧密连接程度,其中,pcDNA3.1-occludinΔOCC1转染组每天的大分子通过率均比pcDNA3.1-occludinΔOCC2转染组显著降低（P<0.05）,表明闭合蛋白第二个胞外环对紧密连接的影响程度比第一个胞外环要高。结论:闭合蛋白2个胞外环都能够影响小鼠TM4细胞紧密连接的程度... 

【文章来源】：中华男科学杂志. 2020年08期 第675-680页 北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

Western印迹检测Occuldin的表达

为分析闭合蛋白2个不同胞外环对紧密连接的影响,设计了不同的缺失载体,分别缺失或者同时缺失闭合蛋白的胞外环碱基,将其转入体外紧密连接细胞模型后,用大分子通过率来衡量紧密连接的紧密程度。各组的大分子通过率见图4。从第3～6天,大分子通过率逐步下降,表明TM4细胞从第3天开始形成紧密连接,到第6天时,紧密连接完全形成。空白对照组、阴性对照组和同时缺失组(pcDNA3.1-occludinΔOCC1+OCC2)每天的大分子通过率,经过ANOVA分析,差异无显著性。从第3～6天,pcDNA3.1-occludinΔOCC1转染组和pcDNA3.1-occludinΔOCC2转染组每天的大分子通过率均显著低于阴性对照组(P<0.05),表明闭合蛋白2个胞外环都能够增加TM4的紧密连接程度。其中,pcDNA3.1-occludinΔOCC1转染组每天(3～6 d)的大分子通过率均显著低于pcDNA3.1-occludinΔOCC2转染组(P<0.05),表明闭合蛋白第二个胞外环对紧密连接的影响程度比第一个胞外环要高。图4 各组TM4每天的大分子通过率

各组TM4每天的大分子通过率


本文编号：2906071