TLRs信号通路激活的MSCs外泌体对巨噬细胞极化及外泌体微流芯片提取方法研究

发布时间：2020-12-19 00:22

　　研究背景巨噬细胞在组织损伤修复中扮演重要角色,按其免疫调节的功能可分为促炎M1型和抗炎M2型。两者在一定的条件下可发生表型转换,巨噬细胞的极化方向一定程度上影响了组织修复的进程。研究发现,细胞囊泡系统及细胞外泌体亦是调节巨噬细胞极化的重要途径。间充质干细胞外泌体（Mesenchymal stem cells derived exosomes,MSCs-Exo）由于其能够发挥和间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）相似的生物学特性,日益得到重视。近年来研究表明,激活MSCs上不同的Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）导致MSCs产生不同的炎症调节因子,进而通过外泌体传递细胞因子调控炎症反应。然而,不同TLRs信号刺激产生的外泌体对巨噬细胞极化的影响及在其中所起的作用却未见报道。因此,明确MSCs与巨噬细胞之间的相互作用关系有利于我们更深刻的理解MSCs在组织损伤修复中对疾病病程的潜在影响,从而在临床上为基于MSCs-Exo无细胞免疫疗法提供新思路。外泌体是目前研究的一个热点,被认为是临床上重要的疾病诊疗生物标志物,可以揭示源细... 

【文章来源】：湖北科技学院湖北省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

倒置荧光显微镜下观察MSCs形态及成骨成脂诱导结果

不表达 CD34（4.50﹪）、CD45（4.62﹪）（图2），符合公认的 MSCs 表型，流式结果表明，本实验所用的 BM-MSCs 符合间充质干细胞特性。图 2 流式细胞术对 MSCs 表面标记物的鉴定结果注：MSCs 表达 CD90、CD29、CD44，不表达 CD45、CD342.2 BM-MSCs 分泌的外泌体特性透射电子显微镜下观察 BM-MSCs 分泌的 exosome（MSCs-Exo）为圆形或椭圆形的形态，直径约为直径多为 40-200 nm 之间（图 3），有完整的双层膜囊泡结构。Western blot 显示提取的外泌体表达间充质干细胞外泌体标志性蛋白CD9、HSP70，而 BM-MSCs 几乎不表达 HSP70 标记物（图 4）。透射电镜及 Western blot 结果均证明 BM-MSCs 能正常分泌 exosome，可用于后面的实验研究。图 3 透射电镜下 MSCs-Exo 的形态 (200 nm

2 流式细胞术对 MSCs 表面标记物的鉴定结Cs 表达 CD90、CD29、CD44，不表达 CD4外泌体特性下观察 BM-MSCs 分泌的 exosome（M为直径多为 40-200 nm 之间（图 3），示提取的外泌体表达间充质干细胞外泌Cs 几乎不表达 HSP70 标记物（图 4）。tern blot 结果均证明 BM-MSCs 能正常

【参考文献】：
期刊论文
[1]外泌体分离与鉴定方法的研究进展[J]. 龚春梅,徐远飞,周继昌.  生命科学. 2018(03)
[2]巨噬细胞极化的研究进展[J]. 宛硕,黄艳,陈庭金,徐劲,余新炳.  中国病原生物学杂志. 2015(11)
[3]骨髓间充质干细胞的特性及应用基础研究进展[J]. 连真珍,林绍强.  中华细胞与干细胞杂志(电子版). 2013(01)



本文编号：2924886