红色荧光金葡菌假体感染临床株的构建

发布时间：2020-12-21 02:31

　　目的建立红色荧光标记金黄色葡萄球菌（金葡菌）假体感染（PJI）临床株,探究工具菌的生物学特性及和初步应用可行性。方法通过分子克隆手段构建mCherry红色荧光表达质粒,通过电转化和噬菌体转导构建红色荧光标记金葡菌PJI临床株。通过生长曲线检测,体外成膜和生物量分析和荧光强度测量鉴定工具菌生物学特性。采用RAW264.7细胞株、工具菌建立共培养模型。采用该模型示踪不同锌离子浓度处理的巨噬细胞对于荧光PJI金葡菌吞噬能力。使用独立样本t检验、重复测量方差分析对定量数据进行统计。结果使用Gibson系统成功构建了荧光表达质粒pRMC2-ptsmCherry,并且使用噬菌体Phage11将该质粒成功导入金葡菌假体感染临床株ST1792。较之于野生株ST1792,荧光金葡菌ST1792-pRMC2-pts-mCherry两者的生长曲线没有统计学差异（F=0.012,P>0.05）。在0.5%葡萄糖胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSBG）内,两者的生物膜光密度（OD）值分别为（3.700±0.003）和（3.715±0.042）（t=0.6056,P>0.05）;10%滑液中生物膜OD值为（... 

【文章来源】：中华关节外科杂志(电子版). 2020年02期

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

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差Ｊｆ?ｔＰ?＞?０．?０５）丨質Ｅ为ＫＢ（：鹧鸾自??胨大豆肉汤培养基）条件下两种金葡菌生长曲线，示两者生长曲线基本一致，生长能力无差异｛Ｆ?＝０．?０１２，?Ｐ?＞０．?０５）??０?ｊｉｍｏｌ／Ｌ?１５?ｊｉｍｏｌ／Ｌ?３０?ｊｉｍｏｌ／Ｌ?４５?｜〇ｍｏｌ／Ｌ?６０?［ｊ．ｍｏｌ／Ｌ??０?ｍｉｎ??３０?ｍｉｎ??ＩＢＥＢＰＥＨ??＿ｊ■■??ｍｍｍｍｍ??、４０??ｍ??ｂ??Ｉ??．?１５?３０?４５?６０??？?锌离＋浓度（｜ａｍｏｌ／Ｌ）?？??图３不同浓度的锌离子刺激巨噬细胞２４?ｈ后，对巨噬细胞吞噬功能的影响。图Ａ为不同时间点荧光显微镜下（ｘ６３）观察??到的吞噬情况；图Ｂ为不同培养条件对巨噬细胞吞噬率的影响，结果表明锌离子浓度＞３０?ｐｍｏｌ／Ｌ对巨噬细胞的吞噬率的影??响差异有统计学意义，其中＾－３０｜＾〇１／１＾和０｜＾〇１／１４农度比较（￡＝４．７５，／）＜０．０１），１＾５（＾１１１〇１／１＾和０｜＾１１１〇１／：１浓度比较（《?＝??４．?０８６，Ｐ?＜?０．?０５），ｃ￣６０?ｊｊｉｍｏｌ／Ｌ?和?０?ｐｍｏｌ／Ｌ?浓度比较（ｉ?＝?４．?７８６，Ｐ?＜?０．?０１）??２４??４８??培养时ｆｎｌ?（ｈ）??７２??４?Ｉ－??４８?ｈ??２４?ｈ??阴性??０．??０６ＳＯ??１０??３?２?１??（Ｊｓ／ｓｏ／ｓ／ｄ／ｏｌ?＞０？南絮保贫１＾??

【参考文献】：
期刊论文
[1]稳定生物发光金葡菌临床株假体周围关节感染动物模型的构建[J]. 郭阁永,王加兴,谈佳琪,汤瑾,王坚镪,沈灏.  中华关节外科杂志(电子版). 2016(04)
[2]荧光蛋白研究进展[J]. 杨杰,张智红,骆清铭.  生物物理学报. 2010(11)



本文编号：2929017