钙敏感受体介导的不规则钙振荡在A549细胞中调控NFκB转录的机制
发布时间：2020-12-27 19:43
目的 钙敏感受体（calcium sensing receptor,CaSR）在多数肿瘤细胞中均有表达,包括肺腺癌细胞,尤其是在高分化肺癌中高表达。钙离子作为重要的第二信使,参与许多细胞学行为,不规则钙振荡作为其表现形式之一参与信号通路的转导,而CaSR可以介导不规则钙振荡发生。本实验初步探究CaSR介导的不规则钙振荡在A549细胞中调控NFκB转录的可能机制。方法 1.用钙离子探针Fura-2/AM孵育A549细胞,在常氧、缺氧24h和缺氧48h条件下分别给予组胺处理或未处理,同时利用钙离子成像系统检测胞浆游离钙离子浓度的变化;在转染CaSR-过表达质粒后按照上述条件下检测钙离子浓度变化,统计和对比钙振荡各动力学参数如频率（frequency）、累积波宽（cumulative spikeduration,CSD）和振幅（amplitude）在各组间的变化。2.转染GFP-RelA质粒,缺氧48h后给予10μM组胺刺激,孵育钙离子探针Fura-red/AM后,利用共聚焦显微镜同步监测胞浆钙离子浓度和转录因子NFκB核转位荧光强度变化,统计分析钙振荡各参数和核转位荧光强度变化之间的关系。...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组别条件下不规则钙振荡图：监测胞浆钙离子浓度时间均为1200s
图 2. 各组别条件下野生型 A549 发生不规则钙振荡各参数统计。A.CSD(S)-NFκB；B. CSD(S)-STAT3；C.频率 f（min-1）；D.振幅 amplitude（nM）。（各组间统计学差异表示为*p<0.001，#p<0.05。）统计学结果分析显示：达到 NFκB 活化阈值（180 nM）的累积波宽比较：缺氧时间越长其对应的 CSD-NFκB 明显升高：缺氧 24h 未处理组和缺氧 48h 未处理组有统计学差异（*p<0.001）；缺氧 24h 组胺处理组和缺氧 48h 组胺处理组有统计学差异（*p<0.05）。给予组胺刺激的组别比对照组的 CSD-NFκB 也明显升高：缺氧 24h 未处理组和缺氧 24h 组胺处理组有统计学差异（*p<0.001）；缺氧 48h 未处理组和缺氧 48h组胺处理组有统计学差异（*p<0.05）。达到 STAT3 活化阈值（395 nM）的累积波宽比较：单纯的缺氧时间越长其对应的 CSD- STAT3 明显升高：缺氧 24h 未处理组和缺氧 48h 未处理组有统计学差异（*p<0.001）。给予组胺刺激的组别比对照组的 CSD-STAT3 也明显升高：缺氧 24h 未处理组和缺氧 24h 组胺处理组有统计学差异（*p<0.001）；缺氧 48h 未处理组和缺氧 48h 组胺处理组有统计学差异（*p<0.001）。
图 3. 各组别条件下不规则钙振荡代表图。监测胞浆钙离子浓度时间均为 1200 s。Ai-Aiii 为 CaSR-过表达 A549 细胞在缺氧 24h 给予 10 μM 组胺刺激后的不规则钙振荡图；Bi-Bii 为 CaSR-过表达 A549 细胞在缺氧 48h 后给予 10 μM 组胺刺激后的不规则钙振荡图。Ci-Ciii 分别为常氧条件下给予 10 μM 组胺刺激、缺氧 24h 给予 10 μM 组胺刺激和缺氧 48h 给予 10 μM 组胺刺激后的不规则钙振荡图。组胺处理时间均为 20 min。实验结果如上图所示：CaSR-过表达 A549 细胞不规则钙振荡的趋势特点均为随着记录时间的延长波宽逐渐减小，振幅逐渐减小，频率逐渐减小，这可能是由于在实验条件下肿瘤细胞随着监测时间的延长而状态不佳；且不规则钙振荡的振幅和频率与常氧状态下相比都随着缺氧时间增加而增高，这可能是因为肺癌细胞在机体的内环境就是缺氧状态，且肿瘤细胞周围有炎性细胞浸润，故在 CaSR 过表达后在常氧条件下给予组胺处理也可发生钙振荡。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Calcium-sensing receptor in colorectal inflammation and cancer: Current insights and future perspectives[J]. Luca Iamartino,Taha Elajnaf,Enik? Kallay,Martin Schepelmann. World Journal of Gastroenterology. 2018(36)
本文编号：2942368
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组别条件下不规则钙振荡图：监测胞浆钙离子浓度时间均为1200s
图 2. 各组别条件下野生型 A549 发生不规则钙振荡各参数统计。A.CSD(S)-NFκB；B. CSD(S)-STAT3；C.频率 f（min-1）；D.振幅 amplitude（nM）。（各组间统计学差异表示为*p<0.001，#p<0.05。）统计学结果分析显示：达到 NFκB 活化阈值（180 nM）的累积波宽比较：缺氧时间越长其对应的 CSD-NFκB 明显升高：缺氧 24h 未处理组和缺氧 48h 未处理组有统计学差异（*p<0.001）；缺氧 24h 组胺处理组和缺氧 48h 组胺处理组有统计学差异（*p<0.05）。给予组胺刺激的组别比对照组的 CSD-NFκB 也明显升高：缺氧 24h 未处理组和缺氧 24h 组胺处理组有统计学差异（*p<0.001）；缺氧 48h 未处理组和缺氧 48h组胺处理组有统计学差异（*p<0.05）。达到 STAT3 活化阈值（395 nM）的累积波宽比较：单纯的缺氧时间越长其对应的 CSD- STAT3 明显升高：缺氧 24h 未处理组和缺氧 48h 未处理组有统计学差异（*p<0.001）。给予组胺刺激的组别比对照组的 CSD-STAT3 也明显升高：缺氧 24h 未处理组和缺氧 24h 组胺处理组有统计学差异（*p<0.001）；缺氧 48h 未处理组和缺氧 48h 组胺处理组有统计学差异（*p<0.001）。
图 3. 各组别条件下不规则钙振荡代表图。监测胞浆钙离子浓度时间均为 1200 s。Ai-Aiii 为 CaSR-过表达 A549 细胞在缺氧 24h 给予 10 μM 组胺刺激后的不规则钙振荡图；Bi-Bii 为 CaSR-过表达 A549 细胞在缺氧 48h 后给予 10 μM 组胺刺激后的不规则钙振荡图。Ci-Ciii 分别为常氧条件下给予 10 μM 组胺刺激、缺氧 24h 给予 10 μM 组胺刺激和缺氧 48h 给予 10 μM 组胺刺激后的不规则钙振荡图。组胺处理时间均为 20 min。实验结果如上图所示：CaSR-过表达 A549 细胞不规则钙振荡的趋势特点均为随着记录时间的延长波宽逐渐减小，振幅逐渐减小，频率逐渐减小，这可能是由于在实验条件下肿瘤细胞随着监测时间的延长而状态不佳；且不规则钙振荡的振幅和频率与常氧状态下相比都随着缺氧时间增加而增高，这可能是因为肺癌细胞在机体的内环境就是缺氧状态，且肿瘤细胞周围有炎性细胞浸润，故在 CaSR 过表达后在常氧条件下给予组胺处理也可发生钙振荡。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Calcium-sensing receptor in colorectal inflammation and cancer: Current insights and future perspectives[J]. Luca Iamartino,Taha Elajnaf,Enik? Kallay,Martin Schepelmann. World Journal of Gastroenterology. 2018(36)
本文编号：2942368
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