缺氧诱导因子1α对不同毒力刚地弓形虫从速殖子到缓殖子转化的影响

发布时间：2020-12-29 19:38

　　目的研究缺氧诱导因子1α（HIF1α）在3种弓形虫虫株由速殖子到缓殖子转化过程中的作用,阐释HIF1α对弓形虫不同毒力虫株转化的影响。方法选取3种不同毒力弓形虫虫株（Ⅰ型RH-GFP,Ⅱ型ME49-GFP和Ⅲ型VEG）,分别感染野生型HIF1α细胞（HIF1αWT）和缺陷型HIF1α细胞（HIF1αKO）,在碱性条件下进行诱导转化,通过免疫荧光试验（Immunofluorescence assay,IFA）检测不同条件下弓形虫诱导转化情况,通过细胞中RH-GFP和ME49-GFP荧光值的变化分析Ⅰ型和Ⅱ型弓形虫的转化水平。无荧光标记的Ⅲ型VEG虫株选用速殖子特异性表达蛋白SAG1作为弓形虫速殖子阶段的特异性标记。将包裹弓形虫缓殖子囊肿外层的囊壁作为缓殖子的特异性识别标记,用DBA抗体识别,将封片的载玻片置于荧光显微镜下观察并计数。将玻片上总量为300个被弓形虫感染的细胞分为3组:（1）只含有速殖子（GFP）;（2）只含有缓殖子（DBA）;（3）同时含有速殖子和缓殖子（GFP+DBA）。每个实验条件至少分别计数3张玻片并计算其平均值。结果最佳诱导转化时间为诱导后96h,Ⅰ型RH-GFP弓... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020年02期 北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

转化诱导后不同时间点弓形虫的转化率

ME49-GFP感染的HIF1αKO细胞在诱导转化96h后，只含有GFP蛋白标记的速殖子，此时弓形虫无转化；在HIF1αWT细胞中，有20%～25%只含有DBA的细胞，30%左右只含有GFP的细胞，其他大部分细胞均处于转化中期，即ME49-GFP虫株速殖子正在HIF1αWT细胞中发生转化。图2所示，3种细胞均属于转化中期的细胞，同时含有速殖子ME49-GFP和缓殖子外层囊壁的荧光标识DBA，在囊壁内可见到被BAG1标记的绿色团状的弓形虫缓殖子，细胞外也散在清晰可见的大量速殖子ME49-GFP。2.3 III型VEG虫株（MOI=3）的转化

与前两种虫株在HIF1αKO细胞中的诱导转化结果相同，VEG感染的HIF1αKO细胞中既无DBA的形成，也没有转化中间阶段SAG1+DBA的细胞，所有被弓形虫感染的细胞均只有绿色荧光蛋白标记的SAG1；大部分HIF1αWT细胞中的VEG发生了速殖子到缓殖子的转化，完全转化为DBA的比例为55%～60%，均在缓殖子外形成完整包绕缓殖子的红色环装囊壁（图3）。只含有速殖子的细胞比例为15%左右，其他被感染细胞处于转化中间阶段。图4所示，细胞处于转化中期，在被DAPI染色的细胞核旁，有清晰可见的缓殖子形成的囊肿，周围也有大团红色DBA标识的包绕弓形虫缓殖子的囊壁，其内是由BAG1标记的缓殖子，而在细胞外则可见少量游离的VEG弓形虫速殖子。讨论


本文编号：2946188