miR-128-3p在睾丸热激致生精凋亡中的作用及机制研究

发布时间：2021-01-04 16:30

　　第一部分小鼠睾丸热激前后测序的差异miRNA分析及验证【目的】对小鼠睾丸热激前后miRNA测序结果进行生物信息学分析及验证,以发现在睾丸热激致生精损伤的关键miRNA及重要途径。【方法】基于课题组之前测序结果,对得到的差异miRNAs（倍数≥2）进行生物信息学分析,包括用miRanda软件预测差异miRNAs靶基因,并对预测的靶基因进行GO富集和KEGG通路分析。然后43℃水浴小鼠睾丸,获取小鼠睾丸组织,分别提取热激前后小鼠的睾丸组织的RNA,然后用茎环引物RT-qPCR法验证miRNA测序结果。【结果】总共预测到差异miRNA的5392个靶基因,通过GO分析发现它们富集于生物过程、细胞成分和分子功能,通过KEGG通路分析发现主要参与几种途径,包括核糖体通路,缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路和氧化磷酸化等。通过对这些差异的miRNAs进行茎环RT-qPCR发现7个下调的miRNAs与测序结果一致,而4个上调的miRNAs中,只有miR-21a-3p与测序结果一致。【结论】由结果我们可以看出miR-449a-3p、miR-298-5p、miR-92... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

基因GO分析miRNA靶基因注：A，B和C分别代表富集的生物过程，细胞组分和分子功能（p<0.05）

19图 1.2 miRNA 靶基因 KEGG 途径分析注：KEGG 途径分析主要参与以下几种途径，包括核糖体途径，缺氧诱导因子 1（HIF-1）信号通路，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和氧化磷酸化等（p<0.05）。二、测序差异 miRNA 验证使用茎环RT-qPCR在来自对照组和热处理组的10只动物中验证所有11种差异表达的 miRNA。睾丸组织 11 种 miRNA 及 U6 基因 PCR 的扩增曲线及融解曲线如图 2.1及图 2.2 所示。在短暂的阴囊热处理后 6 小时，发现其中 7 种 miRNA 显着下调（miR-449a-3p，miR-298-5p，miR-92a-1-5p，miR-423-5p，miR-423-3p，miR-128-3p，

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文miR-340-3p），发现 1 个显着上调（miR-21a-3p），结果与我们的测序数据一致。然而，如图 2.3 所示，在我们基于 qPCR 的验证中，未发现 11 个先前鉴定的 miRNA 中的 3 个（miR-98-5p，miR-3968 和 miR-201-3p）的表达水平显着改变，与我们的测序数据不符。因此，仅选择具有一致改变的表达水平的 miRNA 用于进一步研究。

【参考文献】：
期刊论文
[1]lncRNA SNHG16在结直肠癌组织和细胞中表达及其调控结肠癌细胞中GPAM表达的机制[J]. 周云松,温小辉,张琦,寇炜.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2019(01)
[2]miR-128-3p在宫颈癌中的表达及其发病机制[J]. 张华东,张显峰,刘桂琴,闫晓歌.  临床与病理杂志. 2018(07)



本文编号：2957065