肺炎链球菌StkP/CiaR组成耐药相关二元信号传导系统的分析与鉴定

发布时间：2021-01-15 12:01

　　目的确定肺炎链球菌β-内酰胺抗生素耐药相关胞内应答调节蛋白CiaR能与跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶StkP结合组成StkP/CiaR二元信号传导系统（TCSS）。方法采用PCR扩增stkP基因胞内区片段（IC-stkP）,T-A克隆测序确认序列正确后构建其原核表达系统。SDS-PAGE检查IC-stkP片段和我们以往构建的ciaR基因原核表达系统目的重组蛋白rIC-StkP和rCiaR表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rIC-StkP和rCiaR。采用Co-IP和LC-MS/MS鉴定rIC-StkP捕获的肺炎链球菌靶蛋白。采用等离子共振法（SPR）和等温滴定量热法（ITC）检测rCiaR与rIC-StkP结合能力。结果所构建的IC-stkP片段原核表达系统能有效表达rIC-StkP。SDS-PAGE结果显示提纯的rIC-StkP和rCiaR在胶上均为单一蛋白质条带。CiaR可与rIC-StkP特异性共沉淀,其3个裂解肽位于CiaR分子内且序列完全相符。SPR和ITC结果显示,rCiaR与rIC-StkP呈高亲和力强结合,其KD值分别为1.526×10-9 mol/L和1.980×10-6 ... 

【文章来源】：中华微生物学和免疫学杂志. 2020,40(06)北大核心

【文章页数】：7 页

【参考文献】：
期刊论文
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[2]肺炎链球菌CiaR调控pbps和csRNAs基因表达作用及其与耐药相关性[J]. 张新蔚,黄燕颖,楼永良,严杰,孙爱华.  中华微生物学和免疫学杂志. 2017 (01)
[3]肺炎链球菌ciaH基因与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性研究[J]. 张少妮,孙颜红,楼永良,严杰,孙爱华.  中华微生物学和免疫学杂志. 2015 (09)
[4]肺炎链球菌phpP基因重组表达及其产物PP2C型磷酸酶活性的研究[J]. 孙颜红,张少妮,楼永良,严杰,孙爱华.  中华微生物学和免疫学杂志. 2014 (11)
[5]肺炎链球菌ciaH/R基因重组表达及CiaH/R与β-内酰胺类耐药相关性[J]. 孙爱华,樊欢,夏肖萍,李向阳,严杰.  浙江大学学报(医学版). 2008(06)



本文编号：2978836