HEV保护性基因工程抗体的制备及功能研究

发布时间：2021-01-19 21:42

　　目的:制备抗戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）的人鼠嵌合基因工程抗体并研究其中和保护作用及特性。方法:将已获得的抗HEV鼠源单克隆抗体基因序列进行优化,设计人鼠嵌合的工程化抗体基因序列,将其克隆入真核表达载体;表达载体共转染293F细胞进行表达优化,高效制备基因工程化抗体;通过酶联免疫反应（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、免疫荧光及HEV细胞感染模型,研究工程化抗体的结合能力及中和活性。结果:成功构建基因工程化人鼠嵌合HEV保护性抗体表达载体,在293F表达系统中实现高效表达。抗体表达产率达30 mg/L,亲和力为1.202×10-8mol/L。免疫荧光检测结果显示抗体能够灵敏、特异地与已感染HEV的Kernow细胞结合,实时荧光定量PCR检测结果显示抗体可保护易感的C3A细胞不被HEV感染。结论:基因工程化抗体抗体具有高效的HEV结合能力及中和作用,能有效阻断HEV感染,并实现低成本高效表达。 

【文章来源】：南京医科大学学报(自然科学版). 2020,40(03)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

基因工程抗体表达载体结构示意图

采用Protein A在AKTA纯化仪亲和纯化抗HEV全分子IgG，得到纯化的嵌合anti-HEV IgG,SDS-PAGE鉴定并使用Tanon Gis软件进行半定量分析，以未转染的293F细胞培养上清作为阴性对照，结果显示抗体高效表达，该抗体重、轻链分子量分别为55 kDa及28 k Da（图3），纯度大于99%，表达产率达30 mg/L。2.4 纯化后的嵌合anti-HEV IgG效价滴度检测

采用ELISA对纯化后的嵌合anti-HEV IgG进行效价滴度检测，以未转染的293F细胞培养上清作为阴性对照，最终检测滴度达到1∶1 280 000（图4）。图4 纯化后的嵌合anti-HEV IgG的滴度检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]HEV保护性抗体的制备与功能研究[J]. 许纪玲,蔡杰,何苗,杨永林.  中国输血杂志. 2017(05)
[2]全人源抗狂犬病病毒糖蛋白抗体的制备及鉴定[J]. 王晓蕾,朱进,哈卓,张晓萍,杨岚,杨晓明,刘云成,Mason Lu,冯振卿.  南京医科大学学报(自然科学版). 2017(02)
[3]人源抗H7N9血凝素中和抗体IgG的制备及鉴定[J]. 陈雅,熊四平,唐奇,王怡雯,耿以如,顾慧,徐亚如,周荧,仇镇宁,冯振卿,朱进.  南京医科大学学报(自然科学版). 2016(07)



本文编号：2987764