人脐带间充质干细胞的微生物学安全性评价

发布时间：2021-01-21 11:46

　　目的对按标准化工艺流程制备的人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）制剂进行微生物学安全性评价。方法人脐带华通氏胶分离的间充质干细胞培养扩增至P5代。显微镜下观察细胞的形态特征,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达;培养法检测细菌、真菌污染,指示剂培养显色法和快速聚合酶链反应（PCR）法检测支原体污染,鲎试剂凝胶法检测细菌内毒素;胶体金法检验特定人源病毒、梅毒螺旋体;荧光定量PCR法检测人乳头瘤病毒（HPV）。结果按照标准化流程分离培养hUC-MSCs传代至P5代呈均一的长梭型成纤维细胞样贴壁生长,细胞表面标志物CD73、CD90和CD105阳性率大于98%,CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR<2%;受检人脐带间充质干细胞鲎试剂凝胶法检测内毒素水平小于0.25EU/mL,培养检测未见细菌、真菌菌落生长,指示剂培养显色法和快速PCR检测均显示无支原体污染;胶体金法和荧光定量PCR法检测特定人源病毒、梅毒螺旋体和HPV（包含18种高危亚型）全部为阴性结果。所有检测方法的阳性对照标本均呈阳性结果,证实检测方法稳定可靠。结论本研究采用的标准化干细胞制备工艺流程稳定可靠,采用... 

【文章来源】：重庆医学. 2020,49(12)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

第5代人脐带间充质干细胞在光镜下的形态特征（×100)

检查结果显示第5代次的hUC-MSCs的表面标志物CD73、CD90、CD105阳性表达率均大于98%,CD34、CD14、CD45、CD19、HLA-DR阳性表达率均小于2%，见图2。2.3 细菌、真菌污染检测结果

支原体指示剂培养显色法检测结果显示，阳性对照组和实验组hUC-MSCs的培养基颜色相差极大，可见明显差异；阴性对照组和实验组hUC-MSCs的培养基颜色接近。通过快速PCR检测法检测结果显示，实验组和阴性对照组只呈现内参条带产生，阳性组则有很亮的支原体特异条带出现。支原体指示剂培养显色法和快速PCR检测法检测结果均为阴性，未发现支原体污染，见图4。图4 支原体检测结果

【参考文献】：
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本文编号：2991101