PyMT过表达慢病毒诱导C57BL/6小鼠乳腺癌模型建立和生物学特性鉴定
发布时间：2021-01-22 02:48
目的:采用多瘤病毒中间T抗原（Polyoma virus middle T antigen,PyMT）过表达的慢病毒感染雌性C57BL/6小鼠乳腺上皮细胞,构建C57BL/6乳腺癌模型,并分析肿瘤组织的病理学特点、分子分型等生物学特性。方法:通过将PyMT过表达质粒与慢病毒包装质粒MDL、REV和VSVG共转染HEK293T细胞进行慢病毒包装,病毒液浓缩后,采用乳腺导管注射方法,将病毒液注射入雌性C57BL/6小鼠的乳腺导管中,定期观察小鼠肿瘤发生情况,记录肿瘤生长情况;肿瘤长径达到1.5厘米后,取肿瘤和肺组织切片进行HE染色,观察肿瘤类型、生长特点和转移情况;肿瘤组织冰冻切片,免疫荧光检测GFP和CK14的共定位情况,免疫组织化学检测肿瘤组织ERα,PR,HER2,Ki67,CK5和α-SMA表达,确认肿瘤的分子分型;提取肿瘤组织蛋白,检测PI3K/AKT、MAPK/ERK、JAK/STAT3信号通路的激活情况,以及与增殖、抗凋亡相关分子c-MYC、CyclinD1、Bcl-2、Bcl-xl的表达;当肿瘤体积达到150 mm3左右时,对小鼠进行腹腔注射化疗药物阿...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PyMT慢病毒诱导C57BL/6小鼠产生肿瘤Figure1.C57BL/6micesdevelopedmammarytumorsafterinjectinglentivirusexpressing
冰冻切片免疫荧光检测表达 GFP 的 PyMT 与上皮细胞标志物 CK14 2. Immunofluorescence analysis of PyMT virus infected mammary cell in green and CK14 was stained in red. Nuclear DNA was stained with blue).T 过表达慢病毒诱导的肿瘤病理类型为乳头状癌深入了解该模型肿瘤的病理特点，对肿瘤组织和肺组织进行了，肿瘤病理类型为导管内乳头状癌，肺组织并未见到转移灶。学检测了乳腺上皮细胞标志物 CK5 和α-SMA，结果显示腺上缺失，肌上皮标志物α-SMA 表达呈现阳性，表明肿瘤局限于层。为了解肿瘤的分子分型，免疫组织化学检测了乳腺癌组织 Ki67 的表达，结果显示，所有的肿瘤 HER2 表达阴性，Ki67 本 ERα与 PR 呈现双阳性，其余样本 ERα和 PR 双阴性。
图 3-1 H&E 分析肿瘤组织和肺组织病理特点Figue3-1. The tumor tissue and lung were stained with H & E. Magnification:400x.
本文编号：2992398
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PyMT慢病毒诱导C57BL/6小鼠产生肿瘤Figure1.C57BL/6micesdevelopedmammarytumorsafterinjectinglentivirusexpressing
冰冻切片免疫荧光检测表达 GFP 的 PyMT 与上皮细胞标志物 CK14 2. Immunofluorescence analysis of PyMT virus infected mammary cell in green and CK14 was stained in red. Nuclear DNA was stained with blue).T 过表达慢病毒诱导的肿瘤病理类型为乳头状癌深入了解该模型肿瘤的病理特点，对肿瘤组织和肺组织进行了，肿瘤病理类型为导管内乳头状癌，肺组织并未见到转移灶。学检测了乳腺上皮细胞标志物 CK5 和α-SMA，结果显示腺上缺失，肌上皮标志物α-SMA 表达呈现阳性，表明肿瘤局限于层。为了解肿瘤的分子分型，免疫组织化学检测了乳腺癌组织 Ki67 的表达，结果显示，所有的肿瘤 HER2 表达阴性，Ki67 本 ERα与 PR 呈现双阳性，其余样本 ERα和 PR 双阴性。
图 3-1 H&E 分析肿瘤组织和肺组织病理特点Figue3-1. The tumor tissue and lung were stained with H & E. Magnification:400x.
本文编号：2992398
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/2992398.html
