小鼠第四脑室室管膜CD133+细胞及其分化谱系的单细胞转录组测序
发布时间：2021-01-23 09:53
神经干细胞是一类具有自我更新能力,可以分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的细胞类群,对于神经系统的发育和神经组织稳态的维持起着重要作用。目前人们普遍认为神经干细胞主要分布于侧脑室室管膜下区（SVZ）和海马齿状回颗粒下层（SGZ）。我们之前的研究发现,小鼠第四脑室也存在着静息态的神经干细胞,并且这些神经干细胞可以被VEGF细胞因子激活。在大脑损伤和神经退行性疾病中,神经干细胞可以通过分化和迁移来对神经系统进行修复。因此,小鼠第四脑室室管膜区细胞类群的表达谱研究,对解析神经系统发育过程和相关神经性疾病的机制具有重要意义。本研究以CD133+神经干细胞谱系示踪小鼠为实验材料,分离小鼠第四脑室室管膜区的CD133+神经干细胞及其增殖分化的后代细胞,采用优化的SMARTseq2方案构建单细胞c DNA文库,使用基于Tn5转座酶的Tagmentation方法构建测序文库,最后在Illumina平台进行测序。生物信息学分析结果表明,我们的测序reads比对到小鼠基因组上的成功率达到91.02%,平均每个单细胞检测到了6744个基因。我们发现小鼠第四脑室室管膜区存在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四种异质性的细胞...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
海马齿状回颗粒细胞层的神经发生Figure1.1Neurogenesisinsubgranularzoneofhippocampusdentategyrus
第 3 章 实验方法2）取一瓶脱氧核糖核酸酶 I（100mg），加入 10mL Nuclease-Free Water，震荡至充分溶解，4℃放置备用。3）取 1.5ml tube，加入 1ml DMEM/F12 培养基，冰上放置备用。4）取两个 6cm dish，各加 3ml HBSS，置于冰上备用。编号 1、2。5）另取 6cm dish，在 dish 底部铺上一层定性滤纸，加入 2ml HBSS，使滤纸刚好被浸润，置于冰上。6）将已经注射 Tamoxifen 的转基因小鼠或三周龄野生型小鼠引颈处死，取出大脑，迅速先后在 dish1 和 dish2 中清洗干净血液，转移到定性滤纸上准备解剖。7）用手术刀片从脑顶部，沿中脑与小脑连接处将脑切开，此时可见倒三角型的第四脑室腔室。如图 3.1 所示，左图红色线为切开位置，右图红色矩形为挑取的第四脑室室管膜位置。
图 4.1. Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen 小鼠基因型鉴定凝胶电泳Figure 4.1 Genotype identification results of Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen mice图中每两条泳道代表一只老鼠，一条泳道表示用 ZsGreen 引物的扩增结果，另一条泳道代表用 Wild type 引物扩增结果。ZsGreen 引物的产物长度为 199bp，Wild type 引物的扩增产物为 297bp。ZsGreen 纯合小鼠应表现为只有 199bp 产物，而不含有 297bp 产物。图中红色方框圈出了 ZsGreen 杂合小鼠，其它均为 ZsGreen纯合小鼠。4.1.2 CD133-Cre-ERT2 小鼠基因型鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]Single-Cell Sequencing Technologies: Current and Future[J]. Jialong Liang,Wanshi Cai,Zhongsheng Sun. Journal of Genetics and Genomics. 2014(10)
本文编号：2995013
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
海马齿状回颗粒细胞层的神经发生Figure1.1Neurogenesisinsubgranularzoneofhippocampusdentategyrus
第 3 章 实验方法2）取一瓶脱氧核糖核酸酶 I（100mg），加入 10mL Nuclease-Free Water，震荡至充分溶解，4℃放置备用。3）取 1.5ml tube，加入 1ml DMEM/F12 培养基，冰上放置备用。4）取两个 6cm dish，各加 3ml HBSS，置于冰上备用。编号 1、2。5）另取 6cm dish，在 dish 底部铺上一层定性滤纸，加入 2ml HBSS，使滤纸刚好被浸润，置于冰上。6）将已经注射 Tamoxifen 的转基因小鼠或三周龄野生型小鼠引颈处死，取出大脑，迅速先后在 dish1 和 dish2 中清洗干净血液，转移到定性滤纸上准备解剖。7）用手术刀片从脑顶部，沿中脑与小脑连接处将脑切开，此时可见倒三角型的第四脑室腔室。如图 3.1 所示，左图红色线为切开位置，右图红色矩形为挑取的第四脑室室管膜位置。
图 4.1. Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen 小鼠基因型鉴定凝胶电泳Figure 4.1 Genotype identification results of Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen mice图中每两条泳道代表一只老鼠，一条泳道表示用 ZsGreen 引物的扩增结果，另一条泳道代表用 Wild type 引物扩增结果。ZsGreen 引物的产物长度为 199bp，Wild type 引物的扩增产物为 297bp。ZsGreen 纯合小鼠应表现为只有 199bp 产物，而不含有 297bp 产物。图中红色方框圈出了 ZsGreen 杂合小鼠，其它均为 ZsGreen纯合小鼠。4.1.2 CD133-Cre-ERT2 小鼠基因型鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]Single-Cell Sequencing Technologies: Current and Future[J]. Jialong Liang,Wanshi Cai,Zhongsheng Sun. Journal of Genetics and Genomics. 2014(10)
本文编号：2995013
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