阿奇霉素单克隆抗体的制备及其免疫检测方法的建立

发布时间：2021-01-28 05:47

　　目的将阿奇霉素（AZM）通过衍生形成半抗原,制备小鼠抗阿奇霉素单克隆抗体（mAb）,初步鉴定其特性。方法采用活性酯法使AZM与载体牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,合成免疫抗原AZM-BSA和检测抗原AZM-OVA。用AZM-BSA免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得杂交瘤细胞株50D10。将该细胞株注射BALB/c小鼠制备AZM mAb,并以此mAb建立ELISA检测AZM的方法。结果 AZM mAb的效价为1∶4.0×10⁵,属于IgG1型。建立的间接竞争ELISA（icELISA）灵敏度为0.287μg/L,半数抑制浓度(IC₅₀)为1.33μg/L。AZM mAb与红霉素、罗红霉素、多拉菌素、克拉霉素、替米考星和泰乐菌素的交叉反应率均小于0.1%。牛奶中AZM的添加回收率在79.6%～104.1%之间,变异系数在16.4%～27.3%之间。结论制备出灵敏度高、特异性强的AZM mAb,为AZM的快速检测方法的建立奠定了基础。 

【文章来源】：细胞与分子免疫学杂志. 2020,36(04)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

AZM人工抗原的合成路线图

本研究制备的半抗原为AZM-GA, AZM-GA的Mr为862, 正离子和负离子质谱鉴定结果分别是863和861(图2)。与AZM-GA加上或者去掉一个质子的Mr相吻合, 说明AZM-GA衍生物偶联成功。再用活化酯法将AZM-GA与载体蛋白(BSA、 OVA)分子上的氨基偶联起来, 形成稳定的酰胺键, 即合成完全抗原。由于AZM没有特征的紫外吸收峰所以无法用紫外吸收光谱法进行鉴定, 我们采用免疫学检测手段, 即二次免疫之后检测小鼠尾尖血效价。尽管耗时较久, 但此方法更直观也更准确。免疫过的5只小鼠血清效价至少达到1∶25 600(图3), 表明AZM人工抗原的制备是成功的。图3 二次免疫后小鼠的血清效价

二次免疫后小鼠的血清效价


本文编号：3004462