补肾化痰祛瘀方对铜负荷肝豆状核变性模型小鼠卵泡发育障碍的影响
发布时间：2021-02-01 17:43
目的探讨补肾化痰祛瘀方对铜负荷小鼠卵泡发育障碍的影响及其作用机制。方法将雌性C57小鼠随机分为6组,即正常组、铜负荷模型组、二巯丁二酸组、肝豆灵组、补肾化痰祛瘀方组、补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组,每组20只。采用高铜复制铜负荷小鼠模型,即以100 mg/kg硫酸铜（CuSO4·5H2O）每天上午同一时间灌胃1次,正常组用等量的生理盐水灌胃,共28 d。在给铜的第15天开始除正常组和模型组灌胃生理盐水外,其他4组每日分别灌胃给药,二巯丁二酸组0.16 g/kg、肝豆灵组1.2 g/kg、补肾化痰祛瘀方组1.5 g/kg、补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组,共14 d至给铜的第28天结束。运用促性腺激素促排方法检测小鼠排卵数,苏木精-伊红染色观察各级卵泡发育情况,电镜观察小鼠卵丘复合物超微结构,采用免疫荧光染色法检测卵丘复合物颗粒细胞Ki67的表达水平以观察细胞增殖情况。结果与正常组比较,各组小鼠排卵数、正常次级卵泡和窦卵泡数、正常线粒体数目和颗粒细胞Ki67表达水平显著减少（P<0.05）;异常线粒体数目显著增加（P<0.05）;补肾化痰...
【文章来源】：北京中医药大学学报. 2020,43(03)北大核心
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
各组小鼠卵巢病理改变结果 (HE染色 ×100)
各组相比于正常组小鼠卵丘复合物内正常线粒体数目明显减少(P<0.01),异常变性的线粒体数目明显增加(P<0.01);与铜负荷模型组比较,二巯丁二酸组、肝豆灵组、补肾化痰祛瘀方组、补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组的正常线粒体数目明显增加、异常变性线粒体数目明显减少(P<0.05);与二巯丁二酸组比较,肝豆灵组、补肾化痰祛瘀方组在增加正常线粒体数目、减少异常变性线粒体数目方面下降(P<0.05),但补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组可显著增加正常线粒体数目、减少异常变性线粒体数目(P<0.05);与肝豆灵组比较,补肾化痰祛瘀方组和补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组正常线粒体数目增加(P<0.05);与补肾化痰祛瘀方比较,补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组正常线粒体数目显著增加、异常变性线粒体数目减少(P<0.01)。见图2、表3。表3 各组小鼠卵丘复合物内线粒体数目比较 (104/mm2; x ˉ ±s ;n=12)Table 3 Number of mitochondria in cumulus complex of mice in different groups (104/mm2; x ˉ ±s ;n=12) 组别Groups 剂量Dose (g/kg) 正常线粒体数目Number of normol mitochondria 异常线粒体数目Number of abnormol mitochondria 正常组Normal group 9.16±0.84 1.50±0.07 铜负荷模型组Copper-loaded model group 3.75±0.62## 2.99±0.09## 二巯丁二酸组DMSA group 0.16 5.80±0.73##▲▲ 2.104±0.10##▲ 肝豆灵组GDL group 1.20 4.13±1.29##▲** 2.39±0.08##▲* 补肾化痰祛瘀方组BSHTQYF group 1.50 5.16±0.68##▲▲*&& 2.36±0.06##▲* 补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组BSHTQYF+DMSA group 1.50+0.16 6.72±0.59##▲▲**&&ΔΔ 1.75±0.07#▲▲*&&ΔΔ F 68.296 523.562 P <0.000 1 <0.000 1 注:与正常组比较#P<0.05 ##P<0.01;与铜负荷模型组比较▲P<0.05 ▲▲P<0.01;与二巯丁二酸组比较*P<0.05 **P<0.01;与肝豆灵组比较&P <0.05 &&P <0.01;与补肾化痰祛瘀方组比较ΔP<0.05 ΔΔP<0.01。Note: #P<0.05 ##P<0.01, compared with normal group; ▲P<0.05 ▲▲P<0.01, compared with copper-loaded model group; *P<0.05 **P<0.01, compared with DMSA group; &P<0.05 &&P<0.01, compared with GDL group; ΔP<0.05 ΔΔP<0.01, compared with BSHTQYF group.
表4 各组小鼠卵丘复合物颗粒细胞Ki67的表达率 (%; x ˉ ±s ;n=12)Table 4 Granulosa cell Ki67 expression of cumulus complex of mice in different groups (%; x ˉ ±s ;n=12) 组别 Groups 剂量Dose(g/kg) 阳性表达率Positive expression rate 正常组 Normal group 93.75±2.80 铜负荷模型组 Copper-loaded model group 35.00±3.06## 二巯丁二酸组 DMSA group 0.16 74.58±3.36##▲▲ 肝豆灵组 GDL group 1.20 54.83±4.19##▲▲** 补肾化痰祛瘀方组 BSHTQYF group 1.50 65.00±3.17##▲▲*& 补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸 BSHTQYF+DMSA group 1.50+0.16 85.00±3.17##▲▲**&&ΔΔ F 493.179 P <0.000 1 注:与正常组比较#P<0.05 ##P<0.01;与铜负荷模型组比较▲P<0.05 ▲▲P<0.01;与二巯丁二酸组比较*P<0.05 **P<0.01;与肝豆灵组比较&P <0.05 &&P <0.01;与补肾化痰祛瘀方组比较ΔP<0.05 ΔΔP<0.01。Note: #P<0.05 ##P<0.01, compared with normal group; ▲P<0.05 ▲▲P<0.01, compared with copper-loaded model group; *P<0.05 **P<0.01, compared with DMSA group; &P<0.05 &&P<0.01, compared with GDL group; ΔP<0.05 ΔΔP<0.01, compared with BSHTQYF group.3 讨论
【参考文献】：
期刊论文
[1]119例肝豆状核变性临床特征及致病基因ATP7B变异谱分析[J]. 谭文婷,向密,但芸婕,郭衍志,向小梅,朱研,胡俊,邓国宏. 第三军医大学学报. 2018(18)
[2]肝豆灵片治疗肝豆状核变性痰瘀互结证的疗效观察[J]. 徐磊,蔡永亮,蒋怀周,王艳昕,韩辉,侯志峰,马守亮,徐明安. 中国实验方剂学杂志. 2017(15)
[3]肝豆灵片联合二巯丙磺酸钠对痰瘀互结型肝豆状核变性患者血清丙二醇、超氧化物歧化酶的影响[J]. 方媛,张静,陈怀珍,赵漫丽,王玉,方向. 中国实验方剂学杂志. 2017(13)
[4]线粒体功能指标在辅助生殖技术中的应用[J]. 王佳怡,凌秀凤,童华. 国际生殖健康/计划生育杂志. 2017(01)
[5]补肾健脾方对免疫性卵巢功能衰退小鼠性激素及卵子质量的影响[J]. 冯桂玲,李静,周小琳. 中医杂志. 2016(16)
[6]以闭经为首发症状的肝豆状核变性1例[J]. 黄妙灵,马洪明. 广东医学. 2016(11)
[7]代谢组学技术比较肝豆灵片与青霉胺的排铜机制[J]. 蒋怀周,王键,董继扬,刘磊. 中成药. 2016(01)
[8]补肾化痰祛瘀中药治疗Wilson病患者月经不调临床观察[J]. 韩辉,金仁桃,吴丽敏,杨文明,王艳昕,鲍蔓蔓,张娟,方向. 中医药临床杂志. 2015(10)
[9]中药肝豆灵对肝豆状核变性患者尿微量蛋白的影响[J]. 张娟,鲍远程,谢道俊,童建兵,周磊,杨波,丁伟军,韩辉,沈斌. 安徽中医药大学学报. 2014(03)
[10]补肾活血调周法改善反复体外受精-胚胎移植失败患者卵巢储备功能的机理研究[J]. 宋俏蔚,陈嫣,孙亦婷,徐彩华. 中华中医药学刊. 2014(02)
博士论文
[1]基于PI3K/AKT信号通路研究新加归肾丸调节大鼠卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的分子机制[D]. 龙旭.成都中医药大学 2015
[2]补肾活血法对PCOS排卵障碍及大鼠颗粒细胞影响的研究[D]. 杨正望.湖南中医药大学 2006
[3]补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌及其相关基因表达的影响[D]. 夏天.天津中医学院 2005
硕士论文
[1]补肾毓麟颗粒治疗薄型子宫内膜（肾虚血瘀证）的临床观察[D]. 刘杰.北京中医药大学 2017
[2]益肾促排卵汤联合HCG对排卵障碍性不孕患者刺激周期干预的临床研究[D]. 季丹.南京中医药大学 2017
[3]基于GPER信号转导通路探讨补肾中药促进卵巢颗粒细胞增殖的机理研究[D]. 蔚建斌.山东中医药大学 2016
[4]肝豆状核变性家系的遗传学分析[D]. 刘沁.中南大学 2012
[5]MMP2、Ki67在宫颈癌介入治疗后的表达及意义[D]. 杨秀凤.青岛大学 2005
本文编号：3013174
【文章来源】：北京中医药大学学报. 2020,43(03)北大核心
【文章页数】：9 页
【部分图文】：
各组小鼠卵巢病理改变结果 (HE染色 ×100)
各组相比于正常组小鼠卵丘复合物内正常线粒体数目明显减少(P<0.01),异常变性的线粒体数目明显增加(P<0.01);与铜负荷模型组比较,二巯丁二酸组、肝豆灵组、补肾化痰祛瘀方组、补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组的正常线粒体数目明显增加、异常变性线粒体数目明显减少(P<0.05);与二巯丁二酸组比较,肝豆灵组、补肾化痰祛瘀方组在增加正常线粒体数目、减少异常变性线粒体数目方面下降(P<0.05),但补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组可显著增加正常线粒体数目、减少异常变性线粒体数目(P<0.05);与肝豆灵组比较,补肾化痰祛瘀方组和补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组正常线粒体数目增加(P<0.05);与补肾化痰祛瘀方比较,补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组正常线粒体数目显著增加、异常变性线粒体数目减少(P<0.01)。见图2、表3。表3 各组小鼠卵丘复合物内线粒体数目比较 (104/mm2; x ˉ ±s ;n=12)Table 3 Number of mitochondria in cumulus complex of mice in different groups (104/mm2; x ˉ ±s ;n=12) 组别Groups 剂量Dose (g/kg) 正常线粒体数目Number of normol mitochondria 异常线粒体数目Number of abnormol mitochondria 正常组Normal group 9.16±0.84 1.50±0.07 铜负荷模型组Copper-loaded model group 3.75±0.62## 2.99±0.09## 二巯丁二酸组DMSA group 0.16 5.80±0.73##▲▲ 2.104±0.10##▲ 肝豆灵组GDL group 1.20 4.13±1.29##▲** 2.39±0.08##▲* 补肾化痰祛瘀方组BSHTQYF group 1.50 5.16±0.68##▲▲*&& 2.36±0.06##▲* 补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸组BSHTQYF+DMSA group 1.50+0.16 6.72±0.59##▲▲**&&ΔΔ 1.75±0.07#▲▲*&&ΔΔ F 68.296 523.562 P <0.000 1 <0.000 1 注:与正常组比较#P<0.05 ##P<0.01;与铜负荷模型组比较▲P<0.05 ▲▲P<0.01;与二巯丁二酸组比较*P<0.05 **P<0.01;与肝豆灵组比较&P <0.05 &&P <0.01;与补肾化痰祛瘀方组比较ΔP<0.05 ΔΔP<0.01。Note: #P<0.05 ##P<0.01, compared with normal group; ▲P<0.05 ▲▲P<0.01, compared with copper-loaded model group; *P<0.05 **P<0.01, compared with DMSA group; &P<0.05 &&P<0.01, compared with GDL group; ΔP<0.05 ΔΔP<0.01, compared with BSHTQYF group.
表4 各组小鼠卵丘复合物颗粒细胞Ki67的表达率 (%; x ˉ ±s ;n=12)Table 4 Granulosa cell Ki67 expression of cumulus complex of mice in different groups (%; x ˉ ±s ;n=12) 组别 Groups 剂量Dose(g/kg) 阳性表达率Positive expression rate 正常组 Normal group 93.75±2.80 铜负荷模型组 Copper-loaded model group 35.00±3.06## 二巯丁二酸组 DMSA group 0.16 74.58±3.36##▲▲ 肝豆灵组 GDL group 1.20 54.83±4.19##▲▲** 补肾化痰祛瘀方组 BSHTQYF group 1.50 65.00±3.17##▲▲*& 补肾化痰祛瘀方+二巯丁二酸 BSHTQYF+DMSA group 1.50+0.16 85.00±3.17##▲▲**&&ΔΔ F 493.179 P <0.000 1 注:与正常组比较#P<0.05 ##P<0.01;与铜负荷模型组比较▲P<0.05 ▲▲P<0.01;与二巯丁二酸组比较*P<0.05 **P<0.01;与肝豆灵组比较&P <0.05 &&P <0.01;与补肾化痰祛瘀方组比较ΔP<0.05 ΔΔP<0.01。Note: #P<0.05 ##P<0.01, compared with normal group; ▲P<0.05 ▲▲P<0.01, compared with copper-loaded model group; *P<0.05 **P<0.01, compared with DMSA group; &P<0.05 &&P<0.01, compared with GDL group; ΔP<0.05 ΔΔP<0.01, compared with BSHTQYF group.3 讨论
【参考文献】：
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[6]以闭经为首发症状的肝豆状核变性1例[J]. 黄妙灵,马洪明. 广东医学. 2016(11)
[7]代谢组学技术比较肝豆灵片与青霉胺的排铜机制[J]. 蒋怀周,王键,董继扬,刘磊. 中成药. 2016(01)
[8]补肾化痰祛瘀中药治疗Wilson病患者月经不调临床观察[J]. 韩辉,金仁桃,吴丽敏,杨文明,王艳昕,鲍蔓蔓,张娟,方向. 中医药临床杂志. 2015(10)
[9]中药肝豆灵对肝豆状核变性患者尿微量蛋白的影响[J]. 张娟,鲍远程,谢道俊,童建兵,周磊,杨波,丁伟军,韩辉,沈斌. 安徽中医药大学学报. 2014(03)
[10]补肾活血调周法改善反复体外受精-胚胎移植失败患者卵巢储备功能的机理研究[J]. 宋俏蔚,陈嫣,孙亦婷,徐彩华. 中华中医药学刊. 2014(02)
博士论文
[1]基于PI3K/AKT信号通路研究新加归肾丸调节大鼠卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的分子机制[D]. 龙旭.成都中医药大学 2015
[2]补肾活血法对PCOS排卵障碍及大鼠颗粒细胞影响的研究[D]. 杨正望.湖南中医药大学 2006
[3]补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌及其相关基因表达的影响[D]. 夏天.天津中医学院 2005
硕士论文
[1]补肾毓麟颗粒治疗薄型子宫内膜（肾虚血瘀证）的临床观察[D]. 刘杰.北京中医药大学 2017
[2]益肾促排卵汤联合HCG对排卵障碍性不孕患者刺激周期干预的临床研究[D]. 季丹.南京中医药大学 2017
[3]基于GPER信号转导通路探讨补肾中药促进卵巢颗粒细胞增殖的机理研究[D]. 蔚建斌.山东中医药大学 2016
[4]肝豆状核变性家系的遗传学分析[D]. 刘沁.中南大学 2012
[5]MMP2、Ki67在宫颈癌介入治疗后的表达及意义[D]. 杨秀凤.青岛大学 2005
本文编号：3013174
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