重组抗A型肉毒毒素人鼠嵌合单克隆抗体的瞬时表达及中和活性研究
发布时间：2021-02-16 21:05
为了制备重组抗A型肉毒毒素（botulinum neurotoxin A,BoNT/A）人鼠嵌合单克隆抗体并分析中和活性,以BoNT/A作为抗原筛选鼠源抗BoNT/A噬菌体单链抗体库,将筛选得到的鼠源抗BoNT/A特异性单链抗体的重链和轻链可变区分别克隆到pGP5KCγ和pGP5KCκ载体构建表达质粒。表达质粒共转染HEK-293EBNA1细胞,瞬时表达抗BoNT/A人鼠嵌合单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）。蛋白A亲和纯化mAb,分子排阻高效液相色谱（size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC）分析mAb纯度,小鼠中和试验评价mAb中和活性。结果显示,经过筛选得到4个序列正确且各不相同的抗BoNT/A单链抗体。4个抗BoNT/A人鼠嵌合mAb表达质粒均构建成功并转染HEK-293EBNA1细胞,根据转染效率指示绿色荧光蛋白的表达推测,50%～62. 5%的细胞表达抗BoNT/A抗体。表达上清经过蛋白A亲和纯化,浓度均>200μg/mL,单体纯度均>90%。小鼠中和试...
【文章来源】：生物资源. 2020,42(04)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
抗BoNT/A人鼠嵌合抗体联用中和活性
pGP5KCγ‐VH、pGP5KCκ‐VL及pGP5GFPq三种质粒共转染HEK‐293EBNA1细胞，转染后24 h荧光显微镜下观察4个抗BoNT/A mAb绿色荧光蛋白表达情况（图2）。转染效率指示pGP5GFPq质粒的转染量为抗体表达质粒转染量的1/50，荧光显微镜下观察到大约1%～1.25%的细胞有绿色荧光蛋白表达，则推测50%～62.5%的细胞表达抗BoNT/A抗体。2.4 抗BoNT/A人鼠嵌合抗体的纯化
SEC‐HPLC将纯化的抗BoNT/A抗体的聚体、单体及不完全分子片段有效地分离（图4）。面积归一化积分显示，4个抗BoNT/A人鼠嵌合抗体的单体纯度均大于90%。2.6 A型肉毒毒素毒力
【参考文献】：
期刊论文
[1]人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的构建及验证[J]. 房世娣,赵晓瑞,陈继军,安晨,南建军,毛晓燕. 微生物学免疫学进展. 2019(04)
[2]重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293 EBNA1细胞中的瞬时表达优化[J]. 陈继军,秦海艳,安晨,乔玉玲,李晓进,毛晓燕. 现代生物医学进展. 2015(33)
[3]鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选[J]. 秦海艳,王建锋,熊颖,卢卫嘉,张超,毛晓燕. 生物技术通讯. 2015(01)
博士论文
[1]A型肉毒毒素受体和中和抗体研究[D]. 韦娜.中国人民解放军军事医学科学院 2011
本文编号：3036930
【文章来源】：生物资源. 2020,42(04)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
抗BoNT/A人鼠嵌合抗体联用中和活性
pGP5KCγ‐VH、pGP5KCκ‐VL及pGP5GFPq三种质粒共转染HEK‐293EBNA1细胞，转染后24 h荧光显微镜下观察4个抗BoNT/A mAb绿色荧光蛋白表达情况（图2）。转染效率指示pGP5GFPq质粒的转染量为抗体表达质粒转染量的1/50，荧光显微镜下观察到大约1%～1.25%的细胞有绿色荧光蛋白表达，则推测50%～62.5%的细胞表达抗BoNT/A抗体。2.4 抗BoNT/A人鼠嵌合抗体的纯化
SEC‐HPLC将纯化的抗BoNT/A抗体的聚体、单体及不完全分子片段有效地分离（图4）。面积归一化积分显示，4个抗BoNT/A人鼠嵌合抗体的单体纯度均大于90%。2.6 A型肉毒毒素毒力
【参考文献】：
期刊论文
[1]人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的构建及验证[J]. 房世娣,赵晓瑞,陈继军,安晨,南建军,毛晓燕. 微生物学免疫学进展. 2019(04)
[2]重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293 EBNA1细胞中的瞬时表达优化[J]. 陈继军,秦海艳,安晨,乔玉玲,李晓进,毛晓燕. 现代生物医学进展. 2015(33)
[3]鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选[J]. 秦海艳,王建锋,熊颖,卢卫嘉,张超,毛晓燕. 生物技术通讯. 2015(01)
博士论文
[1]A型肉毒毒素受体和中和抗体研究[D]. 韦娜.中国人民解放军军事医学科学院 2011
本文编号：3036930
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