大肠杆菌麦芽糖结合蛋白联合卡介苗通过TLR2/TLR4诱导的树突状细胞成熟促进Th1细胞活化

发布时间：2021-02-21 21:20

　　课题组前期发现,大肠杆菌麦芽糖结合蛋白（maltose binding protein,MBP）具有免疫增强作用,尤其是当MBP与卡介苗（BCG）联合免疫小鼠后,能够协同促进Th1活化。进一步研究发现,MBP可通过TLR2和TLR4信号诱导巨噬细胞向着M1型分化;通过TLR2/TLR4/TLR9 cross-talk直接诱导CD4⁺T细胞向Th1活化。树突状细胞（Dendritic cell,DC）作为体内提呈功能最强大的抗原提呈细胞,在固有免疫应答和适应性免疫应答过程中发挥着举足轻重的作用。然而,MBP联合BCG对DC细胞的活化、成熟的影响并不清楚,以及通过DC细胞对CD4⁺T细胞的极化方向,尚未进行探讨。本研究为了探讨MBP联合BCG是否影响DC的成熟,免疫磁珠分选获取纯的DC细胞,流式细胞术检测DC细胞CD80、CD86和MHC-II分子的表达。结果显示,MBP联合BCG协同上调DC细胞表面共刺激分子CD80、CD86及MHC-II分子的表达,增加IL-12p70分泌水平,诱导DC细胞成熟、活化。为了探讨MBP联合BCG刺激能否通过DC... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
提要
中文摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 MBP增强免疫应答的机制研究进展
    1.2 BCG激活免疫细胞的机制与TLR有关
    1.3 Toll样受体
        1.3.1 TLRs成员的分布与定位
        1.3.2 TLRs成员的配体和激动剂
        1.3.3 TLRs和DC
    1.4 本课题设计思路及主要研究内容
        1.4.1 本课题的设计思路
        1.4.2 本课题研究的具体内容
        1.4.3 本课题的特色
第2章 MBP联合BCG体外诱导树突状细胞的成熟促进TH1细胞活化
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 主要试剂的配制
        2.1.4 主要实验仪器
    2.2 主要实验方法
        2.2.1 MBP的分离纯化
        2.2.2 实验体系建立
        2.2.3 流式细胞术检测DC细胞CD80、CD86和MHC-II分子表达
        2.2.4 ELISA实验检测细胞培养上清中IL-12p70的分泌
+T细胞的共培养及增殖检测">        2.2.5 DC细胞与CD4⁺T细胞的共培养及增殖检测
+T与DC共培养的IFN-γ和IL-4 分泌">        2.2.6 ELISPOT检测CD4⁺T与DC共培养的IFN-γ和IL-4 分泌
        2.2.7 统计学处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 DC细胞的纯度鉴定
+T细胞的纯度鉴定">        2.3.2 CD4⁺T细胞的纯度鉴定
        2.3.3 MBP联合BCG促进DC共刺激分子和MHC-II分子的表达
        2.3.4 MBP联合BCG促进DC分泌IL-12
        2.3.5 MBP联合BCG对DC诱导Th1活化的影响
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 MBP联合BCG诱导树突状细胞成熟促进TH1细胞活化的机制分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 主要试剂的配制
        3.1.4 主要实验仪器
    3.2 主要实验方法
-/-、TLR4^-/-小鼠TLR2/TLR4的表达鉴定">        3.2.1 RT-PCR实验对TLR2^-/-、TLR4^-/-小鼠TLR2/TLR4的表达鉴定
        3.2.2 小鼠脾脏DC细胞的分离与培养
+T细胞的分离与培养">        3.2.3 小鼠脾脏CD4⁺T细胞的分离与培养
        3.2.4 流式细胞术检测TLR2和TLR4表达
-/-、TLR4^-/-DC细胞CD80、CD86和MHC-II分子表达">        3.2.5 流式细胞术检测TLR2^-/-、TLR4^-/-DC细胞CD80、CD86和MHC-II分子表达
        3.2.6 ELISA实验检测细胞培养上清中IL-12p70的分泌
+T细胞的共培养及增殖检测">        3.2.7 不同小鼠来源的DC细胞与CD4⁺T细胞的共培养及增殖检测
        3.2.8 ELISPOT检测CD4+ T与DC共培养的IFN-γ和IL-4 分泌
        3.2.9 ELISA实验检测细胞培养上清中IL-10 的分泌
        3.2.10 统计学处理
    3.3 实验结果
-/-小鼠或TLR4^-/-小鼠脾脏单个核细胞TLR2/TLR4表达的鉴定">        3.3.1 TLR2^-/-小鼠或TLR4^-/-小鼠脾脏单个核细胞TLR2/TLR4表达的鉴定
        3.3.2 MBP 联合 BCG 促进 DC 细胞 TLR2 的表达
        3.3.3 MBP联合BCG促进DC细胞TLR4的表达
        3.3.4 TLR2对MBP联合BCG促进DC细胞CD80、CD86、MHC-II分子表达的影响
        3.3.5 TLR4对MBP联合BCG促进DC细胞CD80、CD86、MHC-II分子的表达
        3.3.6 TLR2/TLR4对MBP联合BCG刺激DC分泌IL-12p70的影响
+T细胞增殖的影响">        3.3.7 TLR2/TLR4对MBP联合BCG通过DC诱导CD4⁺T细胞增殖的影响
        3.3.8 TLR2/TLR4对MBP联合BCG通过DC诱导Th1活化的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
第4章 MBP联合BCG体内对树突状细胞的成熟作用及诱导TH1活化的机制研究
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 主要试剂的配制
        4.1.4 主要实验仪器
    4.2 主要实验方法
        4.2.1 MBP联合BCG免疫小鼠的过程
        4.2.2 免疫小鼠脾脏DC细胞的分离与培养
+T细胞的分离与培养">        4.2.3 免疫小鼠脾脏CD4⁺T细胞的分离与培养
        4.2.4 流式细胞术检测不同小鼠免疫后DC细胞TLR2和TLR4表达
        4.2.5 流式细胞术检测不同小鼠免疫后DC细胞CD80、CD86和MHC-II分子表达
+T细胞的培养及增殖检测">        4.2.6 不同免疫小鼠来源的CD4⁺T细胞的培养及增殖检测
+T细胞的IFN-γmRNA表达检测">        4.2.7 不同免疫小鼠来源的CD4⁺T细胞的IFN-γmRNA表达检测
        4.2.8 统计学处理
    4.3 实验结果
        4.3.1 MBP联合BCG免疫对野生小鼠DC细胞表面TLR2表达的影响
        4.3.2 MBP联合BCG免疫对野生小鼠DC细胞表面TLR4表达的影响
        4.3.3 MBP联合BCG体内免疫小鼠DC细胞共刺激分子表达的影响
        4.3.4 TLR2对MBP联合BCG在体内促进DC细胞CD80、CD86和MHC-II分子的表达的影响
        4.3.5 TLR4对MBP联合BCG体内免疫小鼠DC细胞共刺激分子表达的影响
+T淋巴细胞增殖的影响">        4.3.6 TLR2/TLR4对MBP联合BCG体内免疫小鼠后CD4⁺T淋巴细胞增殖的影响
+T细胞IFN-γ基因表达的影响">        4.3.7 MBP联合BCG免疫对CD4⁺T细胞IFN-γ基因表达的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人MUC1-MBP融合蛋白诱导小鼠Th1活化[J]. 张淑芳,台桂香,马吉春,高航.  免疫学杂志. 2007(04)
[2]重组人MUC1-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫活性测定[J]. 台桂香,张吉凤,朱迅.  中国免疫学杂志. 2003(11)



本文编号：3044934