ARF6在骨骼肌成肌细胞分化及融合过程中的作用
发布时间：2021-02-24 23:56
骨骼肌细胞也称为骨骼肌肌纤维,由胚胎中胚层单核成肌前体细胞分化融合形成。骨骼肌损伤修复再生过程是肌卫星细胞增殖分化为成肌细胞,后者融合形成新的肌纤维或者与受损肌纤维融合的过程。这些过程的关键环节是成肌细胞融合。体外诱导哺乳动物成肌细胞融合以及动物肌肉损伤模型是研究成肌细胞融合的常用手段。本研究通过这两种方法探究成肌细胞融合的机制,为提高成肌细胞的融合效率提供更多的理论依据。我们前期研究发现PLD1在成肌细胞融合过程中被招募到细胞膜上并影响成肌细胞次级融合过程,但其作用机制并不十分明确。研究表明ARF6是PLD1的上游调节因子之一,在成肌细胞分化融合早期ARF6-GTP表达增加,然而ARF6在成肌细胞融合过程中发挥的作用并不明确,其激活PLD1在成肌细胞融合过程发挥的作用也不明确。因此我们将探究ARF6及其激活PLD1在成肌细胞融合过程中的作用,从而进一步揭示成肌细胞融合机制。目的:1.ARF6在成肌细胞融合过程中的作用。2.ARF6/PLD1在成肌细胞融合过程中的作用。方法:1.利用半定量PCR和实时荧光定量PCR（qP CR）检测ARF6在骨骼肌损伤后修复及成肌细胞融合过程中的表达情...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
成肌细胞融合过程（From:Abmayretal.[21]
第 3 章 实验结果3.1 成肌分化过程中 ARF6 的表达3.1.1 骨骼肌损伤后修复过程中 ARF6 的表达为了研究 ARF6 在骨骼肌损伤后修复过程中的作用，我们用心脏毒素（CTX）对小鼠腓肠肌造成损伤。如图 3.1 A 所示，eMyh 在损伤后 d3-5 表达水平升高，表明CTX肌肉损伤模型建立成功[80]。ARF6表达水平在损伤d2时开始显著升高，直至 d5 其表达水平和其在未损伤肌肉内的表达水平相比都具有显著差异（图 3.1B）；并且单因素方差分析显示损伤后不同时间点 ARF6 表达水平也有统计学差异。而此时间段与成肌干细胞分化修复受损肌纤维的时间段一致，提示 ARF6 可能在骨骼肌损伤后修复过程中发挥作用。
图 3.2 成肌细胞分化过程中 ARF6 的表达变化图 A、B：RT-PCR 检测成肌细胞分化过程中 ARF6 表达。3.2 过表达 ARF6 激活型与非激活型对成肌细胞 L6 分化的影响3.2.1 过表达 ARF6-Q67L/WT-HAL6 成肌细胞的获得与鉴定我们在 L6 成肌细胞中分别过表达 ARF6-Q67L-HA（ARF6 GTP 结合型，ARF6 处于持续激活状态）和 ARF6-WT-HA（ARF6 野生型），通过 Geneticin（遗传霉素）抗药性筛选，获得稳转细胞系 ARF6-Q67L-HAL6 和 ARF6-WT-HAL6。qPCR结果表明ARF6-Q67L-HAL6和ARF6-WT-HAL6两种细胞系ARF6mARF6的表达水平显著升高；Western blot 结果显示两种细胞细胞系分别表达 ARF6-Q67L-HA、ARF6-WT-HA 蛋白（图 3.3A,B）。图 3.3C 是 ARF6-Q67L-HAL6 和ARF6-WT-HA L6 的细胞形态，可以看到其细胞形态并未发生明显的改变，依然
本文编号：3050127
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
成肌细胞融合过程（From:Abmayretal.[21]
第 3 章 实验结果3.1 成肌分化过程中 ARF6 的表达3.1.1 骨骼肌损伤后修复过程中 ARF6 的表达为了研究 ARF6 在骨骼肌损伤后修复过程中的作用，我们用心脏毒素（CTX）对小鼠腓肠肌造成损伤。如图 3.1 A 所示，eMyh 在损伤后 d3-5 表达水平升高，表明CTX肌肉损伤模型建立成功[80]。ARF6表达水平在损伤d2时开始显著升高，直至 d5 其表达水平和其在未损伤肌肉内的表达水平相比都具有显著差异（图 3.1B）；并且单因素方差分析显示损伤后不同时间点 ARF6 表达水平也有统计学差异。而此时间段与成肌干细胞分化修复受损肌纤维的时间段一致，提示 ARF6 可能在骨骼肌损伤后修复过程中发挥作用。
图 3.2 成肌细胞分化过程中 ARF6 的表达变化图 A、B：RT-PCR 检测成肌细胞分化过程中 ARF6 表达。3.2 过表达 ARF6 激活型与非激活型对成肌细胞 L6 分化的影响3.2.1 过表达 ARF6-Q67L/WT-HAL6 成肌细胞的获得与鉴定我们在 L6 成肌细胞中分别过表达 ARF6-Q67L-HA（ARF6 GTP 结合型，ARF6 处于持续激活状态）和 ARF6-WT-HA（ARF6 野生型），通过 Geneticin（遗传霉素）抗药性筛选，获得稳转细胞系 ARF6-Q67L-HAL6 和 ARF6-WT-HAL6。qPCR结果表明ARF6-Q67L-HAL6和ARF6-WT-HAL6两种细胞系ARF6mARF6的表达水平显著升高；Western blot 结果显示两种细胞细胞系分别表达 ARF6-Q67L-HA、ARF6-WT-HA 蛋白（图 3.3A,B）。图 3.3C 是 ARF6-Q67L-HAL6 和ARF6-WT-HA L6 的细胞形态，可以看到其细胞形态并未发生明显的改变，依然
本文编号：3050127
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3050127.html
