人附睾蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

发布时间：2021-02-25 16:46

　　目的:构建人附睾蛋白（HE4）原核表达载体,获得HE4蛋白并对其初步鉴定。方法:优化合成含有两个WAP结构域的HE4基因序列并与载体pET32a（+）连接,构建质粒pET32-HE4,将其转入BL21（DE3）菌中,IPTG诱导表达HE4蛋白。采用镍离子亲和层析法纯化HE4蛋白,Western blot法和SDS-PAGE鉴定HE4蛋白。结果:合成的HE4基因序列产物大小288 bp,双酶切鉴定及测序结果显示成功构建BL21-pET32-HE4表达菌,SDS-PAGE结果显示该蛋白相对分子质量约为30 000,符合预期。37℃条件下0.2 mmol/L IPTG诱导3 h时HE4蛋白表达量较大。纯化获得了HE4蛋白,经Western blot鉴定有HE4抗原性。结论:成功制备了HE4蛋白。 

【文章来源】：郑州大学学报(医学版). 2020,55(05)北大核心

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【部分图文】：

阳性克隆菌落PCR

pET32-HE4质粒的EcoRⅠ和NotⅠ双酶切

BL21- HE4蛋白的表达

【参考文献】：
期刊论文
[1]大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展[J]. 祁浩,刘新利.  安徽农业科学. 2016(17)



本文编号：3051260