重组人抗TNFα单抗制品中CHO宿主细胞蛋白质残留夹心ELISA检测方法的建立及验证

发布时间：2021-02-26 17:33

　　目的建立检测重组人抗TNFα单抗制品中CHO宿主细胞蛋白质（host cell protein,HCP）残留的夹心ELISA法,并进行验证。方法采用二维电泳-Western blot（2D-Western blot）法筛选兔抗CHO HCP多克隆抗体（产品号:AB000103-A、AB000103-C）及羊抗CHO HCP多克隆抗体（批号:3G-0016-PA）中识别重组人抗TNFα单抗特异性CHO HCP覆盖率最高的一种作为检测抗体,建立检测样品中残余HCP的夹心ELISA法,并验证方法的线性、基质干扰、稀释线性、灵敏度、精密度及准确性。结果以覆盖率达57%的AB000103-C号兔抗CHO HCP多克隆抗体作为检测抗体;样品基质干扰HCP检测,样品需稀释6倍;HCP标准品浓度在3. 33～810 ng/mL范围与A450值曲线拟合良好,R2=1,试验内及试验间精密性验证的CV均小于12%,检测限及定量限分别为2. 4和20 ng/mL;20、150及300 ng/mL的加标样品回收率分别为99. 5%、97. 1%及100. 3%。结论成功建立了重组人抗TNFα单抗HCP残留的夹心... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020,33(08)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞及样品
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 HCP标准品的制备
    1.4 CHO HCP多克隆抗体识别HCP覆盖率的分析
    1.5 夹心ELISA方法的建立
    1.6 方法的验证
        1.6.1 线性范围
        1.6.2 基质干扰试验
        1.6.3 样品稀释线性试验
        1.6.4 灵敏度
        1.6.5精密性
        1.6.6准确性
2 结果
    2.1 CHO HCP多克隆抗体识别HCP的覆盖率
    2.2 方法的验证
        2.2.1 线性范围
        2.2.2 基质干扰试验
        2.2.3 稀释线性试验
        2.2.4 灵敏度
        2.2.5 精密性
        2.2.6 准确性
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]宿主细胞残留蛋白质对单克隆抗体药物质量影响及其质量控制[J]. 刘国芳,刘晓志,高健,王志明.  中国生物工程杂志. 2019(10)
[2]重组蛋白制品中大肠埃希菌宿主蛋白残留测定试剂盒的适用性验证[J]. 邓春平,杨波,庄兰芳,李梦瑶,郑赞顺,曲伟.  中国生物制品学杂志. 2017(01)
[3]基因工程药物中宿主细胞蛋白的检测与控制[J]. 王志明.  中国新药杂志. 2016(22)
[4]3种中国仓鼠卵巢细胞蛋白残留量检测试剂盒的比较研究[J]. 张峰,董衍东,郭莎,高凯,王兰.  中国药学杂志. 2016(13)
[5]单抗制品中CHO细胞宿主蛋白残留双抗夹心ELISA检测方法的建立[J]. 柯志,周冬梅,徐军,杨彬,苏彦景,孙文正.  中国生物制品学杂志. 2015(08)
[6]生物技术药物残留宿主蛋白检测方法的研究进展[J]. 李爽,高健,魏敬双.  中国生物制品学杂志. 2008(09)



本文编号：3052924