铜绿假单胞菌基因PA4429-31对PAO1致病性的研究初探

发布时间：2021-02-27 05:10

　　近年来,由于临床上对于抗生素的大量使用,使得许多的临床病原菌产生了耐药性,威胁着人们的健康。铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是普遍存在于各种环境中已知的机会致病菌,能够导致医院内获得性感染。然而,由于铜绿假单胞菌自身所具有的环境适应以及广泛的耐药性,使得对于铜绿假单胞菌的治疗变得较为棘手。因此,了解和控制铜绿假单胞菌的感染是目前临床研究中的一项重要课题。呼吸链对于细菌的生长和代谢过程至关重要,并且参与细菌的耐药和致病性。呼吸链能够作为一个新的靶点治疗铜绿假单胞菌的感染。前期研究发现PAO1（Δ4429）、PAO1（Δ4430）、PAO1（Δ4431）对氨基糖苷类抗生素的抗性增加。同时,发现PAO1（Δ4429）、PAO1（Δ4430）、PAO1（Δ4431）和野生型PAO1相比,培养液颜色明显变浅,推测基因PA4429、PA4430和PA4431可能影响绿脓菌素以及细菌的毒性。根据KEGG网站显示,基因PA4429、PA4430和PA4431可能编码细胞色素c1、细胞色素b以及铁硫蛋白,三个基因一起构成了细胞色素bc1复合体,与PA4427和PA4428构成... 

【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语对照表
第一章 绪论
    1.1 铜绿假单胞菌的致病性
        1.1.1 胞外毒性因子的产生
        1.1.2 细胞表面毒力因子的产生
        1.1.3 生物被膜的形成
    1.2 细菌的电子传递链
        1.2.1 细菌电子传递链的组成
        1.2.2 呼吸链的功能
    1.3 群体感应系统（QUORUM SENSING）
        1.3.1 铜绿假单胞菌QS系统的组成以及与致病性的关系
        1.3.2 群体感应系统的调控机制
    1.4 研究内容和意义
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验所用菌株和质粒
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验器材
        2.1.4 培养基和溶液的配置方法
    2.2 实验方法
        2.2.1 同源序列比对
        2.2.2 系统发育树的构建
        2.2.3 普通PCR
        2.2.4 限制性内切酶酶切和连接反应
        2.2.5 大肠杆菌（DH10B）的感受态细胞的制备
        2.2.6 铜绿假单胞菌感受态的制备
        2.2.7 电转化
        2.2.8 质粒的小剂量提取
        2.2.9 DNA纯化
        2.2.10 构建敲除突变体
        2.2.11 互补菌株的构建
        2.2.12 生长的检测
        2.2.13 细菌菌落（CFU）检测
        2.2.14 基因表达水平的检测
        2.2.15 绿脓菌素的检测
        2.2.16 用BCA法检测蛋白浓度
        2.2.17 ATP产量的检测
        2.2.18 PQS的提取
        2.2.19 鼠李糖脂的检测
        2.2.20 胞外多糖的检测
        2.2.21 弹性蛋白酶的检测
        2.2.22 运动的检测
        2.2.23 抗生素敏感性的检测
第三章 实验结果
    3.1 基因PA4429-31生物信息学分析
        3.1.1 基因PA4429-31同源比对分析
        3.1.2 系统发育树的构建
    3.2 突变体和互补体的构建
        3.2.1 敲除突变体PAO1（Δ4429-31）的构建
        3.2.2 互补菌株的构建
    3.3 基因PA4429-31对于ATP含量的影响
    3.4 基因PA4429-31对于生长的影响
    3.5 基因PA4429-31对抗生素抗性的影响
    3.6 基因PA4429-31对于毒力因子产量的影响
        3.6.1 基因PA4429-31对绿脓菌素的影响
        3.6.2 基因PA4429-31对弹性蛋白酶产量的检测
        3.6.3 基因PA4429-31对胞外多糖的影响
        3.6.4 基因PA4429-31对鼠李糖脂的影响
    3.7 基因PA4429-31对运动的影响
    3.8 基因PA4429-31影响群体感应系统
        3.8.1 基因PA4429-31对Las系统水平的影响
        3.8.2 基因PA4429-31对Rhl系统水平的影响
        3.8.3 基因PA4429-31对PQS系统的影响
第四章 讨论
参考文献
硕士期间的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]铜绿假单胞菌生物被膜研究进展[J]. 高珊,张哲伦,苏杭,韩峰.  中国海洋药物. 2018(05)
[2]铜绿假单胞菌碱性蛋白酶AprA及其抑制剂AprI的表达、纯化和初步的活性验证[J]. 曹润,高亚萍,刘玉,刘成华,靳鹏,马远方,杨光.  军事医学. 2016(12)
[3]铜绿假单胞菌致病机理及中药抗感染的研究现状[J]. 唐金凤,李莉,左国营.  中华中医药学刊. 2016(05)
[4]铜绿假单胞菌群体感应效应系统细菌毒力调节的研究进展[J]. 陈双红,陈锐勇,徐雄利,肖卫兵.  海军医学杂志. 2016(02)
[5]铜绿假单胞菌的致病性及耐药性研究近况[J]. 杨君洋,卢洪洲.  内科理论与实践. 2016(02)



本文编号：3053739