OmpR调控伤寒沙门菌毒力分子机制的初步研究

发布时间：2021-03-02 07:13

　　目的:鉴于OmpR与伤寒沙门菌感染过程中各种应激微环境下的毒力和生存能力密切相关,本研究选取特定应激微环境下的毒力相关基因为研究对象,旨在阐明在该应激微环境下OmpR对其的转录调控机制,从而认识OmpR是如何通过相关基因的表达控制伤寒沙门菌在特定应激微环境下的毒力和生存能力,为了解伤寒沙门菌的感染和致病机制奠定一定的理论基础。方法:1.OmpR基因缺失回补株的制备:构建含有OmpR目的片段的重组载体,所用质粒为p BAD33,将重组载体电转入（35）OmpR,即可得OmpR基因缺失回补株（记为C-（35）OmpR）。同时将空载体p BAD33电转入WT和（35）OmpR中作为相应的对照株（分别记为WT-p BAD33和（35）OmpR-p BAD33）。2.生长曲线测定:以OD600数值作纵坐标,以时间作横坐标,每隔1h检测OD600值绘制生长曲线,观测WT-p BAD、ΔOmpR-p BAD和C-ΔOmpR对数中期（OD600=0.8）时在酸应激条件下的生长情况,以及WT、ΔOmpR和Δhfq在低渗条件下的生长情况。3.实时定量PCR实验检测基因转录水平:提取相应菌株总RNA并逆转录... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

重组载体的测序结果比对Figure4.3BLASTanalysisofthesequencingresultoftherecombiantvector

OmpR 调控伤寒沙门菌毒力分子机制的初步研究 对伤寒沙门菌耐酸力的影响R 对伤寒沙门菌酸应激条件下生长能力的影响定了野生对照株（WT-pBAD33）、缺陷对照株（ΔompC-ΔompR）在酸应激后的生长曲线，结果如图 4.6 所示：-pBAD33 的生长速率明显快于 WT-pBAD33 的生长速率D33 的生长情况一致, 表明 ompR 的突变增强了酸应激条

江苏大学硕士学位论文的 mRNA 水平与 WT-pBAD33 相比无明显差异，酸应激 45 min、90 min 时ΔompR-pBAD33 中 cadB 和 cadC mRNA 水平明显高于 WT-pBAD3（3p 均<0.01），表明在酸应激条件下 OmpR 能够抑制 cadB 和 cadC 的转录。我们将含有 cadB、cadC 整个启动子区域的重组 pHRP309 质粒导入 WT 和ΔompR 中，通过 β-半乳糖苷酶的活性检测研究 OmpR 对耐酸相关基因的转录调控关系，cadB 转录活性结果见图 4.7（b）C，cadC 转录活性结果见图 4.7（b）D：在 0 min 时（即未加入盐酸时），ΔompR 的 β-半乳糖苷酶的活性与 WT 中相比无明显差异；酸应激 45 min 及 90 min 时 ΔompR 中 β-半乳糖苷酶活性均明显高于 WT 中 β-半乳糖苷酶活性（p 均<0.01），表明酸应激条件下 OmpR 对 cadB、cadC 的转录具有负调控关系。


本文编号：3058857