Endoglin对斑马鱼早期血管发育的调节及机制研究

发布时间：2021-03-10 05:14

　　遗传性出血性毛细血管扩张症（Hereditary hemorrhagic telangiectasia,HHT）,也称为郎-奥韦综合征,是一种罕见的常染色体显性遗传病,主要表现为皮肤,粘膜和器官中的血管形成异常。HHT根据突变基因的不同主要分为5类,I型HHT的致病基因是Endoglin,约占该疾病50%。Endoglin是一类位于细胞表面的I型膜糖蛋白,同时也是TGF-β受体复合物的一部分。过去的研究证明了它在血管发育中发挥着至关重要的作用,但是Endoglin调控血管的具体机制以及下游的效应因子依旧缺乏认知。本研究结合斑马鱼动物模型、HHT病人样本,探索Endoglin调控血管发育的机制以及下游效应基因。本研究课题采用的实验方法包括,1.利用斑马鱼为体内模型,显微注射吗啉基寡核苷酸（Morpholino,MO）抑制Endoglin的表达,通过实时荧光定量核酸扩增技术（Real-time Quantitative PCR,RT-qPCR）、原位杂交（in situ hybridization）、流式细胞荧光分选技术（Fluorescence activated cell sortin... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２：?Ｅｎｄｏｇｌｉｎ的时空表达谱

阶段的血管系统。７２小时ｅｒｔｇ－ＭＯ组（注射Ｅｎｄｏｇｌｉｎ?ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ的胚胎）中，??血管发育异常，一些ＩＳＶｓ出现破裂。在Ｅｎｄｏｇｌｉｎ过表达后能够恢复Ｅｎｄｏｇｌｉｎ??ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ导致的缺陷ＩＳＶｓ?（图３Ａ－Ｂ）。Ｆ／／７ａ是斑马鱼中众所周知的内皮细胞??标记物，ｙ７／７ｆｌ－ＧＦＰ＋ＥＣｓ的比例反映了血管细胞的数量［４７］。ＦＡＣＳ分析显示，７２??小时ｅ？ｇ－ＭＯ组中ＧＦＰ＋ＥＣｓ的比例降低至３．４％，而７２小时的Ｃｏｎ－ＭＯ组中为??７．２％?（图３Ｃ－Ｄ）。此外，Ｅｎｄｏｇｌｉｎ的下游基因（／Ｊ／，?／必，？办２）?［３９’４８］的表达在??ｅ？ｇ－ＭＯ组中降低（图３Ｅ）。这些结果表明Ｅｎｄｏｇｌｉｎ敲低会显著地影响斑马鱼??胚胎的血管发育，其中ＩＳＶｓ的缺陷最严重。??Ａ?Ｃｏｎ－ＭＯ?ｅｎｇ－ＭＯ??ｅｎｇ?ｍＲＮＡ?ｅｎｇ－ＭＯ?＋?ｅｎｇ?ｍＲＮＡ??Ｂ?１００％??｜?■?■?■?■?Ｓ?＿??１?桃－■?＿?■?ＭＵｄ??■?■?Ｎｏｒｍａｌ??３１??

图４：?Ｅｎｄｏｇｌｉｎ敲低导致内皮标志物表达的下降。Ａ：利用ＲＴ－ＰＣＲ检测Ｃｏｎ－ＭＯ??和ｅｎｇ＇－ＭＯ组中内皮标志物的表达，包括ｆｅ／ｒ／，ｃｏ％５，／７ｅｙ２，／ｗｏ２和／？ｗ．／。Ｇａｐｅ／／？??被用作内参。Ｂ：使用Ｉｍａｇｅ?Ｊ进行灰度扫描分析Ａ图中凝胶电泳的结果，实现??对于Ｃｏｎ－ＭＯ和ｅｔｔｇ－ＭＯ组中不同内皮标志物的ｍＲＮＡ表达水平的定量统计。??Ｃ：利用整体原位杂交检测２４小时胚胎中Ｃｏｎ－ＭＯ和ｅ？ｇ－ＭＯ组中内皮标志物??的表达（每组ｎ＞?３０）。红色箭头表示内皮标志物显著减少的区域。比例尺为??２００ｐｍ。Ｄ：利用ＲＴ－ｑＰＣＲ检测Ｃｏｎ－ＭＯ和ｍｇ－Ｍｏ组的脑和躯干中内皮标志??物的表达。（７叩办被用作内参（平均值土标准差，重复三次实验）。??


本文编号：3074114