miR-133a-3p高表达对ZIKV复制的影响及其潜在机制

发布时间：2021-03-10 16:37

　　目的探究寨卡病毒（ZIKV）感染A549细胞后诱导的小分子非编码RNA-133a-3p（miR-133a-3p）对ZIKV复制的影响及其潜在机制。方法在1×10⁵/mL腺癌人类肺泡基底上皮细胞系A549中感染ZIKV,感染复数（MOI）为0.5,感染后在不同时间点收取RNA样品,以荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测miR-133a-3p相对表达变化;同时在1×10⁵/mL的A549中,转染3μL的miR-133a-3p模拟物（miR-133a-3p mimic）使miR-133a-3p高表达,转染后24 h,接种MOI=0.5的ZIKV或用终浓度为100μg/L的polyⅠ∶C处理细胞,感染后48 h收取细胞RNA或蛋白样品,通过RT-qPCR和蛋白质印迹法（Western blots）检测ZIKV的RNA的复制水平及宿主抗病毒先天免疫相关基因表达水平;将1μg含干扰素刺激应答元件（ISRE）的萤火虫荧光报告质粒（ISRE-luc）和50 ng海肾荧光报告质粒（pRL-TK）与3μL的miR-133a-3p共转入1×10⁵

【文章来源】：中国输血杂志. 2020,33(04)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

ZIKV感染A549细胞后的病毒复制和上调miR-133a-3p高表达 (n≥3, x ˉ ±s)

RT-qPCR检测miR-133a-3p相对表达量:miR-133a-3p mimic组的相对值为140.3±24.82,远高于其他2组(P<0.05)(图2-A)。RT-qPCR和Western blot检测ZIKV NS5 RNA和NS1蛋白相对表达量:miR-133a-3p mimic组的相对值0.335 5±0.031(图2-B),相对于其他2组被明显抑制(P<0.01)(图2-C)。2.3 miR-133a-3p过表达激活Jak/STAT信号通路经

mimic control或miR-133a-3p mimic处理的A549细胞被ZIKV感染或polyⅠ∶C处理后,在24或48 h收集样品,对IFNα/β)和2种ISGs(ISG15和IFIT1)做RT-qPCR检测:miR-133a-3p的过表达增加了IFNα/β和ISGs的表达(图3-A—H)。为了进一步核实miR-133a-3p对Jak/STAT信号通路的影响,将ISRE-luc/pRL-TK报告质粒与miR-133a-3p mimic或mimic control共转染A549细胞24 h,用ZIKV或PolyⅠ∶C处理细胞48 h,以双重荧光素酶测定法检测:相对于mimic control组,高转miR-133a-3p mimic使IRSE活性明显增强(图3-I)。鉴于ISRE作为ISGs启动子元件启动ISGs转录,足见 miR-133a-3p可以激活Jak/STAT信号通路。3 讨论

【参考文献】：
硕士论文
[1]猪细小病毒感染对PK-15细胞因子转录时相影响的研究[D]. 李厚伟.河南农业大学 2010



本文编号：3074943