心脏移植急性排斥反应淋巴细胞-微泡复合物超声分子成像实验研究

发布时间：2021-03-11 02:40

　　第一部分心脏移植急性排斥反应淋巴细胞趋化性测定与淋巴细胞-微泡复合物构建背景:急性排斥反应是心脏移植术后的重要并发症,目前临床尚无有效的无创影像检测方法。心脏移植急性排斥反应主要由淋巴细胞介导。本研究拟利用淋巴细胞构建靶向超声探针,以期进行心脏移植急性排斥反应超声显像。方法:手术构建大鼠心脏移植模型。①异基因移植组:Brown Norway大鼠为供体,Lewis大鼠为受体;同基因移植组:Lewis大鼠同为供体和受体;②心脏移植受体体内输入DiR标记的淋巴细胞,2小时后离体荧光成像,观察DiR-淋巴细胞在心脏移植受体各器官中的分布;③异基因移植受体体内输入DiI标记的淋巴细胞,15分钟后移植心脏切片,观察DiI-淋巴细胞血管粘附和组织浸润情况;④制备抗大鼠CD4抗体修饰的微泡（MBCD4）,MBCD4与大鼠脾脏淋巴细胞孵育,构建淋巴细胞-微泡复合物（cell-MBs）,光镜下观察cell-MBs形态并测量粒径。结果:①心脏移植受体输入DiR-淋巴细胞2小时后,异基因移植心脏DiR荧光强度显著高于同基因移植心脏（p<0.05）;②异基因移植受体输入DiI-淋巴细胞15分钟后,免疫荧光... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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图１实验设计示意图

华中科技大学博士学位论文??？?Ｎａｔｉｖｅ??ＨｅａｒｔＴＸ?ｈｅａｒｔ?Ｌｉｖｅｒ?Ｓｐｌｅｅｎ?Ｌｕｎｇ?Ｋｉｄｎｅｙ??Ｂ??＂〇?１００?￣｜?Ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ?ｍｏｄｅｌｓ??＾?＂?Ｉ￣Ｉ?Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ?ｍｏｄｅｌｓ??＞８０－??％?＊??ｃ?■?Ｉ?１??１?６０－?＿??４０－?■■?■■??１?ＪＬＵ＿??Ｈｅａｒｔｙ?Ｎａｔｉｖｅ?ｈｅａｒｔｓ??图２?ＤｉＲ－淋巴细胞向异基因移植心脏趋化。（Ａ）?ＤｉＲ－淋巴细胞于输入心脏移植受体２小时后在受??体器官的分布情况。（Ｂ）移植心脏与原位心脏ＤｉＲ荧光强度定量分析。＊为两者比较ｐ＜?０．０１。??于心脏移植大鼠受体输入ＤｉＲ标记的淋巴细胞２小时后，器官离体荧光成像显示??ＤｉＲ－淋巴细胞虫要分布于肝和脾，而其在异基因移植心脏的荧光强度明显高于同基因??移植心脏（图２Ａ）。图２Ｂ定量锫果显示异基因移植心脏的荧光强度约高出同基因移??植心脏３０％，差异具有统计学差异ｓ原位心脏的荧光强度在两组间无显著性差异。??（２）切片免疫焚光检査??２８??

华中科技大学博士学位论文??Ａ?Ｂ??■?Ｈ??图３淋巴细胞体外显微镜图片。（Ａ）相差显微镜下大鼠脾脏淋巴细胞，标尺为１０叫。（Ｂ）激??光共聚焦显微镜下Ｄｉｌ标记的淋巴细胞，标尺为１５卩皿。??ＤＡＰＩ?ＦＩＴＣ－ＣＤ３１?Ｄｉｌ－ｃｅｌｌｓ?ＤＡＰＩ／ＦＩＴＣ／Ｄｉｌ??ＨＵ??■■■Ｂ??■■■■??图４?Ｄｉｌ－淋巴细胞输入异基因心脏移植受体１５分钟后在移植心脏内。第二排和第三排分别显示??Ｄｉｌ－淋巴细胞在移植心脏血管内皮粘附（粗箭头）和组织间隙浸润（细箭头）。标尺为１０?ｐｎ。??Ｄｉｌ为亲脂类幾化青染料，主要对细胞的细胞膜进行染色（图Ｄｉｌ－淋巴细胞??尾静脉输入异基因移植受体１５分钟后，移植心脏切片免疫荧光染色显示Ｄｉｌ－淋巴细??胞己与异基因移植心脏血管内皮粘附，更有甚者，己浸润到心肌组织间质（图４）。??３、Ｃｅｌｌ－ＭＢｓ?构建??（１）制备?ＭＢｃｄ４??ＦＩＴＣ标记的山羊抗小鼠ＩｇＧ抗体与ＭＢｃｒｎ孵育，共聚焦、显微镜下可见微泡上绿??２９??


本文编号：3075718