从BDNF/TrkB信号通路探讨乌头汤对神经病理性疼痛模型小鼠脑神经元的保护作用
发布时间：2021-03-19 19:52
目的:从脑源性神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶受体B（TrkB）信号通路研究乌头汤对神经病理性疼痛模型小鼠的神经元保护作用。方法:40只雄性ICR小鼠随机分为假手术组（Sham）,SNL模型组,乌头汤组(126 mg·kg-1),ANA-12+乌头汤组。建立神经病理性疼痛L5脊神经结扎（SNL）小鼠模型,造模成功后,灌胃给药10 d,脑立体定位注射BDNF/TrkB受体拮抗剂ANA-12(50 nmol·L-1)7 d,免疫组化法检测小鼠海马BDNF,蛋白激酶B（Akt）,环磷酸腺苷（c AMP）反应元件结合蛋白（CREB）蛋白的表达。免疫荧光法观察谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）神经元变化。小鼠海马神经元细胞分离于精准孕18 d的胎鼠脑组织,分为正常组、甘氨酸处理组,ANA-12组(0.5 mmol·L-1),ANA-12+甘氨酸组,ANA-12+乌头汤组,ANA-12+乌头汤+甘氨酸组,细胞免疫荧光法观察原代神经元形态学变化;海马神经元细胞分为正常组、甘氨酸处理组(200 mmol·L-1
【文章来源】：中国实验方剂学杂志. 2020,26(07)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
乌头汤对小鼠海马BDNF/Trk B通路中BDNF,CREB,Akt阳性细胞数的影响(免疫组化，×400)
与正常组比较，甘氨酸处理组谷氨酸能神经元的总树突棘、粗短状树突棘、细小状树突棘和蘑菇状树突棘的数量均显著增高，甘氨酸可诱导谷氨酸能神经元的激活(P<0.01);与甘氨酸处理组比较，ANA-12组，ANA-12+甘氨酸组，ANA-12+乌头汤组和ANA-12+乌头汤+甘氨酸组中谷氨酸能神经元的总树突棘、粗短状树突棘、细小状树突棘和蘑菇状树突棘的数量均明显下降(P<0.05,P<0.01)。见图3，表3。3.3对小鼠海马谷氨酸-氨基丁酸能神经元平衡的影响
本实验构建NP经典模型SNL和海马定位注射ANA-12，通过正、反方向来明确BDNF/Trk B通路对乌头汤联治疗作用的影响。结果显示，在SNL小鼠中BDNF,Akt及CREB的表达量较假手术组均显著降低，乌头汤对上述分子的表达量均有显著地改善，而海马定位注射ANA-12后仅有CREB的表达量受到显著抑制，而Akt的表达量未受到显著影响。海马内谷氨酸和氨基丁酸能神经元的平衡对维持机体的平衡至关重要[17-18]，通过免疫荧光，观察海马内谷氨酸、氨基丁酸能神经元修复的比例。结果显示，乌头汤联可缓解SNL小鼠中谷氨酸-氨基丁酸能神经元的失衡，拮抗BDNF/Trk B通路后乌头汤联失去了调控作用。以上结果表明，乌头汤联可通过调控BDNF/Trk B-CREB通路来调节谷氨酸-氨基丁酸能神经元的失衡，从而达到NP的治疗效果。在体外培养原代海马神经元，通过统计在突触信号传递中发挥重要作用的PSD95[19]表达量和树突棘[20-21]的数量，探究BDNF/Trk B通路在乌头汤联对小鼠海马原代神经元兴奋性和可塑性的影响。课题组前期研究显示，SNL小鼠海马区中过度激活的小胶质细胞会持续释放TNF-α，从而造成神经元的兴奋性损伤，而乌头汤对TNF-α直接诱导的神经损伤具有良好的缓解效果[11]。本研究通过细胞给TNF-α来构建细胞模型，显示乌头汤联可通过激活甘氨酸增加PSD95在初、次级神经元的表达量和增多树突棘数量，而转染BDNF-siRNA质粒，CREB-siRNA质粒后和ANA-12给药后，乌头汤联失去了对PSD95和树突棘的调控作用。表明乌头汤联可通过对BDNF/Trk B-CREB通路的调控来缓解原代神经元兴奋性及可塑性损伤，促进神经修复。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乌头汤调控海马BDNF/Trk B通路以缓解神经病理性疼痛的痛共情绪症状[J]. 吴红艳,师钰琪,朱春燕,林娜. 中国实验方剂学杂志. 2020(01)
硕士论文
[1]乌头汤治疗类风湿性关节炎的药效学及作用机理研究[D]. 陈少珍.广州中医药大学 2006
本文编号：3090133
【文章来源】：中国实验方剂学杂志. 2020,26(07)北大核心
【文章页数】：8 页
【部分图文】：
乌头汤对小鼠海马BDNF/Trk B通路中BDNF,CREB,Akt阳性细胞数的影响(免疫组化，×400)
与正常组比较，甘氨酸处理组谷氨酸能神经元的总树突棘、粗短状树突棘、细小状树突棘和蘑菇状树突棘的数量均显著增高，甘氨酸可诱导谷氨酸能神经元的激活(P<0.01);与甘氨酸处理组比较，ANA-12组，ANA-12+甘氨酸组，ANA-12+乌头汤组和ANA-12+乌头汤+甘氨酸组中谷氨酸能神经元的总树突棘、粗短状树突棘、细小状树突棘和蘑菇状树突棘的数量均明显下降(P<0.05,P<0.01)。见图3，表3。3.3对小鼠海马谷氨酸-氨基丁酸能神经元平衡的影响
本实验构建NP经典模型SNL和海马定位注射ANA-12，通过正、反方向来明确BDNF/Trk B通路对乌头汤联治疗作用的影响。结果显示，在SNL小鼠中BDNF,Akt及CREB的表达量较假手术组均显著降低，乌头汤对上述分子的表达量均有显著地改善，而海马定位注射ANA-12后仅有CREB的表达量受到显著抑制，而Akt的表达量未受到显著影响。海马内谷氨酸和氨基丁酸能神经元的平衡对维持机体的平衡至关重要[17-18]，通过免疫荧光，观察海马内谷氨酸、氨基丁酸能神经元修复的比例。结果显示，乌头汤联可缓解SNL小鼠中谷氨酸-氨基丁酸能神经元的失衡，拮抗BDNF/Trk B通路后乌头汤联失去了调控作用。以上结果表明，乌头汤联可通过调控BDNF/Trk B-CREB通路来调节谷氨酸-氨基丁酸能神经元的失衡，从而达到NP的治疗效果。在体外培养原代海马神经元，通过统计在突触信号传递中发挥重要作用的PSD95[19]表达量和树突棘[20-21]的数量，探究BDNF/Trk B通路在乌头汤联对小鼠海马原代神经元兴奋性和可塑性的影响。课题组前期研究显示，SNL小鼠海马区中过度激活的小胶质细胞会持续释放TNF-α，从而造成神经元的兴奋性损伤，而乌头汤对TNF-α直接诱导的神经损伤具有良好的缓解效果[11]。本研究通过细胞给TNF-α来构建细胞模型，显示乌头汤联可通过激活甘氨酸增加PSD95在初、次级神经元的表达量和增多树突棘数量，而转染BDNF-siRNA质粒，CREB-siRNA质粒后和ANA-12给药后，乌头汤联失去了对PSD95和树突棘的调控作用。表明乌头汤联可通过对BDNF/Trk B-CREB通路的调控来缓解原代神经元兴奋性及可塑性损伤，促进神经修复。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乌头汤调控海马BDNF/Trk B通路以缓解神经病理性疼痛的痛共情绪症状[J]. 吴红艳,师钰琪,朱春燕,林娜. 中国实验方剂学杂志. 2020(01)
硕士论文
[1]乌头汤治疗类风湿性关节炎的药效学及作用机理研究[D]. 陈少珍.广州中医药大学 2006
本文编号：3090133
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3090133.html
