葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变永生化淋巴细胞系的建立

发布时间：2021-03-26 05:30

　　目的收集27例葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变的临床外周血样本,建立永生化淋巴细胞系。方法采用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变检测试剂盒（荧光PCR熔解曲线法）筛查临床样本的突变类型,然后采集外周血,进行永生化淋巴细胞系的转化。提取建系成功的淋巴细胞系的基因组DNA,并用建立的二代测序法进行验证。结果成功建立了27例葡萄糖-6-磷酸脱氢酶永生化淋巴细胞系样本,包括14种不同纯合和杂合突变类型,验证结果表明永生化淋巴细胞系的基因突变类型与临床样本原来标示的突变类型一致。结论本研究建立的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变永生化淋巴细胞系具有稳定的遗传信息,可以作为国家参考品的资源,用于评价葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变试剂盒的性能。 

【文章来源】：分子诊断与治疗杂志. 2020,12(04)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

CNGB030108样本筛查结果

用基因组DNA提取试剂盒提取的永生化淋巴细胞系样本基因组DNA，使用0.8%琼脂糖凝胶电泳，结果显示DNA条带完整，没有拖带或弥散带，表明基因组DNA具有很好的完整性。采用高通量测序法进行验证，样本的结果均与采用荧光PCR熔解曲线法筛查的结果一致，见图3和表2。CNGB030108样本的测序结果显示在X染色体153 762 678 bp（人类基因组hg19）位置处检测到94条reads支持C碱基（正向是G碱基）和108条reads支持T碱基（正向是A碱基），表明是c.519 C>T杂合突变；在X染色体153 760484 bp位置处检测到60条reads支持G碱基（正向是C碱基）和68条reads支持T碱基（正向是A碱基），表明是c.1 376 G>T杂合突变。

采用高通量测序法进行验证，样本的结果均与采用荧光PCR熔解曲线法筛查的结果一致，见图3和表2。CNGB030108样本的测序结果显示在X染色体153 762 678 bp（人类基因组hg19）位置处检测到94条reads支持C碱基（正向是G碱基）和108条reads支持T碱基（正向是A碱基），表明是c.519 C>T杂合突变；在X染色体153 760484 bp位置处检测到60条reads支持G碱基（正向是C碱基）和68条reads支持T碱基（正向是A碱基），表明是c.1 376 G>T杂合突变。3 讨论

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3101042