PHF1是一种新型组蛋白精氨酸甲基化识别蛋白并与PRMT5/CRL4B复合物协同促进乳腺癌发生和转移
发布时间：2021-03-26 16:36
组蛋白翻译后修饰是表观遗传调控的一种重要方式,通过作用于蛋白DNA亲和力进而影响基因转录、DNA复制、DNA损伤修复等多个细胞进程。组蛋白修饰能够调节染色质结构,而其发挥作用的主要方式是通过与具有组蛋白识别结构域的效应蛋白结合,我们称这些蛋白质为组蛋白识别蛋白。这一类具有识别功能的结构域越来越多的被人们所认识和发现,比如PHD结构域、TUDOR结构域、WD40结构域、Chromo结构域等。组蛋白密码通过其识别蛋白被识别和解读,进而向其下游传递信息而产生效应。PHF1就是一个已发现的组蛋白识别蛋白,它能够解读组蛋白翻译后修饰的信息,并借此参与到基因转录调控过程中。PHF1具有一个TUDOR结构域和两个PHD锌指结构域,这些识别结构域使其在表观遗传调控和维持基因组稳定性中发挥重要的作用。研究表明,PHF1与PRC2复合物之间存在相互结合,能够影响EZH2的甲基转移酶活性,对组蛋白H3K27的甲基化水平和HOX基因的转录抑制产生影响。另外,PHF1的TUDOR结构域能够识别H3K36me3和H3tK27me3,证明了其组蛋白识别蛋白的功能,然而其另外两个PHD锌指结构域的作用仍然不明确。在本...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ZWesternblot免疫印迹法检测免疫辛和沛徐徉品中PHF1相百作用的蛋白
天津医科大学博士学位论文PRMT5/WDR77和CRL4B复合物相互结合为有机整体PRMT5、MEP50、MTA1、HDAC2等蛋白，提示PHF1可能与这些蛋白质存在相互作用，结果如图1-2所示。2.1.3免疫共沉淀检测PHF1与多种调控复合物存在作用质谱结果提示我们可能有其他很多蛋白质与PHF1存在结合，比如CRL4B复合物、SIN3A复合物、NuRD复合物、PRMT5/WDR77复合物以及p160家族等。为了验证PHF1与他们之间的结合作用，我们利用HEK 293T细胞的蛋白裂解液，通过免疫共沉淀实验（co-IP）进行了检测。我们首先用PHF1的特异性抗体进行免疫沉淀，通过Western blot电泳后，再分别利用上述其它蛋白的特异性抗体进行免疫印迹的检测。另外，相反的，我们用这些蛋白的抗体进行免疫沉淀，经过SDS PAGE电泳后，再用PHF1的特异抗体进行印迹检测。结果都证明PHF1与这些调控复合物之间都存在相互结合。结果如图1-3所示。
天津医科大学博士学位论文PRMT5/WDR77和CRL4B复合物相互结合为有机整体2.2 PHF1、PRMT5/WDR77和CRL4B复合物存在相互作用2.2.1 PRMT5/WDR77与CRL4B复合物之间存在相互作用在我们验证出的PHF1结合的诸多复合物中，我们发现PRMT5/WDR77和CRL4B之间可能存在结合。CRL4B复合物是由CUL4B，DDB1和ROC1组成的E3泛素连接酶复合物，有报道DDB1会参与形成一种DWD Box模体（DDB1-binding WD40 protein）的结构[71]，即DDB1对于WD40重复结构域具有结合作用。巧合的是，PRMT5的酶活组分WDR77（又名MEP50或p44）正是一个具有WD40重复结构域的蛋白。为了验证这两种复合物是否存在相互作用，我们利用HEK 293T细胞裂解液，通过免疫共沉淀的方法检测两者的结合结果发现无论是用CRL4B复合物组分的特异抗体还是用PRMT5/WDR77蛋白的抗体进行免疫沉淀，都能够通过免疫印迹检测到其他的几种蛋白，说明这两种复合物之间存在相互作用。结果如图1-4所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Reduced expression of E-cadherin/catenin complex in hepatocellular carcinomas[J]. Bo Zhai, Department of Ultrasonic Intervention, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200438, China He-Xin Yan, Shu-Qin Liu, Lei Chen, Meng-Chao Wu, Hong-Yang Wang, International Cooperation Laboratory on Signal Transduction, Eastern Hepatobilliary Surgery Institute, Second Military Medical University, Shanghai 200438, China. World Journal of Gastroenterology. 2008(37)
本文编号：3101905
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
ZWesternblot免疫印迹法检测免疫辛和沛徐徉品中PHF1相百作用的蛋白
天津医科大学博士学位论文PRMT5/WDR77和CRL4B复合物相互结合为有机整体PRMT5、MEP50、MTA1、HDAC2等蛋白，提示PHF1可能与这些蛋白质存在相互作用，结果如图1-2所示。2.1.3免疫共沉淀检测PHF1与多种调控复合物存在作用质谱结果提示我们可能有其他很多蛋白质与PHF1存在结合，比如CRL4B复合物、SIN3A复合物、NuRD复合物、PRMT5/WDR77复合物以及p160家族等。为了验证PHF1与他们之间的结合作用，我们利用HEK 293T细胞的蛋白裂解液，通过免疫共沉淀实验（co-IP）进行了检测。我们首先用PHF1的特异性抗体进行免疫沉淀，通过Western blot电泳后，再分别利用上述其它蛋白的特异性抗体进行免疫印迹的检测。另外，相反的，我们用这些蛋白的抗体进行免疫沉淀，经过SDS PAGE电泳后，再用PHF1的特异抗体进行印迹检测。结果都证明PHF1与这些调控复合物之间都存在相互结合。结果如图1-3所示。
天津医科大学博士学位论文PRMT5/WDR77和CRL4B复合物相互结合为有机整体2.2 PHF1、PRMT5/WDR77和CRL4B复合物存在相互作用2.2.1 PRMT5/WDR77与CRL4B复合物之间存在相互作用在我们验证出的PHF1结合的诸多复合物中，我们发现PRMT5/WDR77和CRL4B之间可能存在结合。CRL4B复合物是由CUL4B，DDB1和ROC1组成的E3泛素连接酶复合物，有报道DDB1会参与形成一种DWD Box模体（DDB1-binding WD40 protein）的结构[71]，即DDB1对于WD40重复结构域具有结合作用。巧合的是，PRMT5的酶活组分WDR77（又名MEP50或p44）正是一个具有WD40重复结构域的蛋白。为了验证这两种复合物是否存在相互作用，我们利用HEK 293T细胞裂解液，通过免疫共沉淀的方法检测两者的结合结果发现无论是用CRL4B复合物组分的特异抗体还是用PRMT5/WDR77蛋白的抗体进行免疫沉淀，都能够通过免疫印迹检测到其他的几种蛋白，说明这两种复合物之间存在相互作用。结果如图1-4所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Reduced expression of E-cadherin/catenin complex in hepatocellular carcinomas[J]. Bo Zhai, Department of Ultrasonic Intervention, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200438, China He-Xin Yan, Shu-Qin Liu, Lei Chen, Meng-Chao Wu, Hong-Yang Wang, International Cooperation Laboratory on Signal Transduction, Eastern Hepatobilliary Surgery Institute, Second Military Medical University, Shanghai 200438, China. World Journal of Gastroenterology. 2008(37)
本文编号：3101905
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