乙型脑炎病毒NS2A-C60A位点突变对其生物学特性影响研究

发布时间：2021-04-03 20:04

　　目的:旨在探索Ⅰ型日本乙型脑炎病毒传代致弱后基因组突变NS2A-C60A对乙脑病毒生物学特性的影响。方法:首先通过对传代致弱及原始乙脑毒株基因组序列进行测序比对、结构预测分析并利用Western blotting（WB）确定了目标研究位点NS2A-C60A;然后使用反向遗传定点突变技术构建拯救了包含NS2A-C60A单点突变的病毒株;最后利用噬斑形态观察、生长曲线、双萤光素酶分析,WB以及炎性因子检测和动物实验研究了该单点突变对于乙脑病毒生物学特性的影响。结果:首次研究发现Ⅰ型乙脑病毒传代致弱会导致NS1’蛋白表达的显著下降以及可能的相关位点NS2A-C60A,并成功拯救获得了NS2A-C60A单点突变毒株r JEV-C60A,研究发现NS2AC60A突变对乙脑病毒的生长特性及噬斑形成没有显著影响,但是能够显著降低乙脑病毒NS1’蛋白的表达,并且该位点突变能够轻微阻碍乙脑病毒对细胞炎性因子表达的抑制,动物实验结果显示NS2A-C60A点突变病毒与原毒株具有相似的神经毒力,说明该位点突变不是影响乙脑病毒毒力致弱的关键位点。结论:新发现的NS2A-C60A位点突变能够显著减少乙脑病毒NS1... 

【文章来源】：中国生物工程杂志. 2020,40(09)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

确定目标研究位点NS2A-C60A结果图

细胞病变观察以及PCR测序鉴定结果证实我们成功拯救获得了NS2A-C60A单点突变乙脑病毒，将其命名为r JEV-C60A。2.3 r JEV-C60A点突变病毒相关生物学特征研究

(1)双萤光素酶分析结果。双萤光素酶分析结果显示NS2A-C60A点突变会导致较低的双萤光素酶活性，暗示该点突变会显著降低NS1"蛋白的表达水平(图5)。图4 原始毒株r JEV-WT与单点突变毒株r JEV-C60A的生长曲线检测结果图

【参考文献】：
期刊论文
[1]蝙蝠作为流行性乙型脑炎病毒宿主的研究[J]. 张海林,张云智,黄文丽,米竹青,龚鹤琴,杨卫红,施华芳,自登云,李兆祥,王静林,章域震,龚正达,袁庆虹,冯锡光.  动物医学进展. 2002(05)
[2]云南省乙型脑炎病毒宿主和媒介研究[J]. 张海林,自登云,龚正达.  中国预防兽医学报. 2000(02)



本文编号：3116994