基于CRISPR文库筛选技术研究SFTSV感染相关的宿主因子

发布时间：2021-04-14 02:49

　　Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV,是一种蜱传的新型布尼亚病毒,于中国大别山地区被首次发现,临床上可以引起严重发热、血小板减少症状,致死率可达30%。自发现以来,中国已有26个省报道了SFTSV感染病例,这已成为公共卫生的重要威胁。由于SFTSV的致病机制和感染相关的宿主细胞因子尚不清楚,目前还没有针对该病毒的特效药物和疫苗。CRISPR/Cas9系统由于具有高效、稳定、操作简单的特点,目前已经作为一种利器被广泛应用在动植物细胞的基因编辑上。近几年,以CRISPR/Cas9为基础的文库筛选技术逐渐发展起来,并在筛选与病毒感染相关的宿主因子方面展现出了巨大潜力。针对丙肝病毒、登革病毒、日本脑炎病毒和西尼罗病毒,目前已经筛选出了一批与内质网功能以及受体相关的宿主因子;而对于其它病毒,比如HIV和流感病毒,目前也筛选出了一些与病毒进入、唾液酸合成以及糖基化修饰通路相关的基因。然而,有关布尼亚病毒的宿主因子筛选的报道很少,因此与这类病毒感染相关的宿主基因和信号通路还不清楚。本研究利用以96孔板为基础的阵列CRISPR文... 

【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１细菌的ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系统应对外源ＤＮＡ的免疫机制（８）??

病毒、细菌等病原微生物感染相关宿主因子；??细胞癌变的相关基因；??细胞抗药性相关的基因等。??Ｒ文库筛选技术的优缺点??感染领域，阳性筛选应用更为广泛，但该方法要求筛选亡，且筛选时间不可过长，否则无法分辨细胞死亡的原是细胞本身衰老或者细胞密度太大引起；筛选后的存活增殖能力，能从单个细胞长成细胞团或片状，否则存活病毒的挑战，但最终因为不能增殖而未被筛选出来，这长。所以从筛选时间上讲，上述两点本身就具有矛盾，握好细胞密度和筛选时间，进而造成不同实验者甚至不选结果一致性差，要么筛选出的基因太局限，不能反映这些基因在功能上不能定位于同一信号通路，而是相互

细胞计数仪：ＴＣ２０?Ａｕｔｏｍａｔｅｄ?Ｃｅｌｌ?Ｃｏｕｎｔｅｒ，美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司生产??２．２技术路线??本部分的总体技术路线分为９６孔板筛选和混杂筛选两部分，如图３。??２１??

【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用研究进展[J]. 陈怡李,姚书忠.  国际生殖健康/计划生育杂志. 2017(06)
[2]基于CRISPR/Cas9系统高通量筛选研究功能基因[J]. 王干诚,马明,叶延帧,席建忠.  遗传. 2016(05)
[3]囊泡转运复合物Retromer和SNX蛋白家族在发育和疾病中的作用[J]. 宋砚泽,沈成豪,李雪,苏立波,林鑫华,吴一卉.  中国科学:生命科学. 2016(01)
[4]CRISPR/Cas9基因组编辑技术在癌症研究中的应用[J]. 王大勇,马宁,惠洋,高旭.  遗传. 2016(01)
[5]CRISPR/Cas9系统的分子机制及其在人类疾病基因治疗中的应用[J]. 璩良,李华善,姜运涵,董春升.  遗传. 2015(10)
[6]CRISPR-Cas9基因编辑技术在病毒感染疾病治疗中的应用[J]. 殷利眷,胡斯奇,郭斐.  遗传. 2015(05)
[7]高等动植物网格蛋白介导的内吞[J]. 王超,潘建伟.  浙江师范大学学报(自然科学版). 2012(04)
[8]Rab家族及其在囊泡运输中的作用[J]. 管睿,崔英.  国外医学.遗传学分册. 2005(02)
[9]网格蛋白介导的内吞作用机制[J]. 姚鹏程,叶恭银.  生命科学研究. 2003(S1)
[10]网格蛋白介导的突触囊泡内吞机制[J]. 李穆丰,施玉.  中国神经科学杂志. 2002(03)

博士论文
[1]SNX16和SNX11的结构生物学研究[D]. 徐进新.中国科学技术大学 2012
[2]SNX10，SNX11蛋白功能研究[D]. 吴斌.中国科学技术大学 2011

硕士论文
[1]重组SNX11蛋白PX结构域的晶体学研究[D]. 许婷婷.中国科学技术大学 2011



本文编号：3136507