N 6 -methyladenosine调控肠病毒71型的复制
发布时间：2021-04-14 02:30
N6-methyladenosine（m6A）是第一个被发现的可逆的RNA修饰,也是分布最广泛的RNA修饰,在RNA的代谢及功能中发挥重要作用。早在40年前已发现病毒RNA含有m6A修饰,但由于技术和知识的限制,病毒m6A的功能并不清楚。直到最近才有报道称m6A修饰存在于艾滋病病毒、流感病毒、黄病毒等病毒的RNA并调控病毒的感染与复制。目前关于病毒m6A修饰及其功能的研究较少且分子机制不清楚,病毒m6A的研究在未来一段时间仍将是病毒表观遗传学研究的热点和难点。为研究EV71 RNA m6A修饰的功能,我们首先使用UHPLC、MeRIP-Northern Blot和MeRIP-Seq等方法证明EV71基因组RNA的VP、2C和3D等蛋白编码区含有m6A修饰。使用Western Blot检测,我们发现EV71感染导致宿主m6A修饰甲基化酶和结合蛋白表达增加而去甲基化酶表达降...
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所)湖北省
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
mRNA化学修饰的结构
第 1 章 引言“Erasers”蛋白去除，而“Readers”蛋白可与其发生直接相互作用并调节多种生理过程（图1.2）。图 1.2 可逆的 m6A 修饰的机制RNA m6A 修饰由 METTL3、METTL14、WTAP 及一些辅助因子组成的甲基转移酶复合体加工产生，可被 FTO 和 ALKBH5 两种去甲基化酶去除。YTH 蛋白、HNRNP 及其他一些蛋白可识别 m6A 修饰并行使多种生物功能。Figure 1.2 Reversible m6A machineryRNA m6A is catalyzed by a methyltransferase complex consisting of METTL3, METTL14,WTAP, and other factors, and is removed by FTO and ALKBH5. YTH proteins, HNRNP andother proteins bind to m6A sites and play critical roles in various biological processes.1.1.2.1 m6A 修饰的“Writers”甲基转移酶的发现为 m6A 功能的研究提供了基础。早期的研究发现两个蛋白复合物（MT-A 和 MT-B）对 mRNA m6A 的形成至关重要(26)。之后，从 MT-A中筛选出的关键分子 methyltransferase like 3（METTL3，也称为 MTA-70）能够结合 S-腺苷甲硫氨酸，被证明是甲基转移酶的一部分（图 1.3）(27)。通过分析METTL3 的同源蛋白发现：methyltransferase like 14（METTL14）与 METTL3有高度同源性，并和 m6A 的形成密切相关，因此 METTL14 被认为是 m6A 甲基转移酶复合体的另一个成员（图 1.3）(28)。虽然 METTL14 与 METTL3 高度同源，但不能像 METTL3 一样催化甲基转移。尽管如此
图 1.3 人类 m6A writers 和 erasers 的蛋白结构域METTL3、METTL14 和 WTAP 是甲基转移酶复合体的组成成分。METTL3 和 METT具有 m6A 甲基化所需的 SAM 结合结构域，而 WTAP 不包含特征性结构域。Eraser 蛋白中，FTO 和 ALKBH5 具有共同的 AlkB 结构域。 与 ALKBH5 相比，FTO 具有 C 端结构域(43)。Figure 1.3 Domain structures of writer and eraser proteins in humanMETTL3, METTL14, and WTAP are components of the methyltransferase complex.METTL3 and METTL4 have a SAM-binding domain required for m6A methylation, whereWTAP contains no characteristic domain. Eraser proteins, FTO and ALKBH5 demethylasehave an AlkB domain in common. Compared to ALKBH5, FTO has an additional C-termindomain (43).1.1.2.3 m6A 修饰的“Readers”m6A 参与 RNA 代谢的各个过程，其功能的发挥主要通过招募 m6A 结合蛋来实现。通过 RNA pull down 实验结合质谱分析，目前已鉴定出一些 m6A 结合
本文编号：3136478
【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所)湖北省
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
mRNA化学修饰的结构
第 1 章 引言“Erasers”蛋白去除，而“Readers”蛋白可与其发生直接相互作用并调节多种生理过程（图1.2）。图 1.2 可逆的 m6A 修饰的机制RNA m6A 修饰由 METTL3、METTL14、WTAP 及一些辅助因子组成的甲基转移酶复合体加工产生，可被 FTO 和 ALKBH5 两种去甲基化酶去除。YTH 蛋白、HNRNP 及其他一些蛋白可识别 m6A 修饰并行使多种生物功能。Figure 1.2 Reversible m6A machineryRNA m6A is catalyzed by a methyltransferase complex consisting of METTL3, METTL14,WTAP, and other factors, and is removed by FTO and ALKBH5. YTH proteins, HNRNP andother proteins bind to m6A sites and play critical roles in various biological processes.1.1.2.1 m6A 修饰的“Writers”甲基转移酶的发现为 m6A 功能的研究提供了基础。早期的研究发现两个蛋白复合物（MT-A 和 MT-B）对 mRNA m6A 的形成至关重要(26)。之后，从 MT-A中筛选出的关键分子 methyltransferase like 3（METTL3，也称为 MTA-70）能够结合 S-腺苷甲硫氨酸，被证明是甲基转移酶的一部分（图 1.3）(27)。通过分析METTL3 的同源蛋白发现：methyltransferase like 14（METTL14）与 METTL3有高度同源性，并和 m6A 的形成密切相关，因此 METTL14 被认为是 m6A 甲基转移酶复合体的另一个成员（图 1.3）(28)。虽然 METTL14 与 METTL3 高度同源，但不能像 METTL3 一样催化甲基转移。尽管如此
图 1.3 人类 m6A writers 和 erasers 的蛋白结构域METTL3、METTL14 和 WTAP 是甲基转移酶复合体的组成成分。METTL3 和 METT具有 m6A 甲基化所需的 SAM 结合结构域，而 WTAP 不包含特征性结构域。Eraser 蛋白中，FTO 和 ALKBH5 具有共同的 AlkB 结构域。 与 ALKBH5 相比，FTO 具有 C 端结构域(43)。Figure 1.3 Domain structures of writer and eraser proteins in humanMETTL3, METTL14, and WTAP are components of the methyltransferase complex.METTL3 and METTL4 have a SAM-binding domain required for m6A methylation, whereWTAP contains no characteristic domain. Eraser proteins, FTO and ALKBH5 demethylasehave an AlkB domain in common. Compared to ALKBH5, FTO has an additional C-termindomain (43).1.1.2.3 m6A 修饰的“Readers”m6A 参与 RNA 代谢的各个过程，其功能的发挥主要通过招募 m6A 结合蛋来实现。通过 RNA pull down 实验结合质谱分析，目前已鉴定出一些 m6A 结合
本文编号：3136478
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