肾上腺髓质素对离体小胶质细胞的作用

发布时间：2017-04-18 18:08

  本文关键词：肾上腺髓质素对离体小胶质细胞的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：实验背景和意义：肾上腺髓质素(Adrenomedullin, AM)最早是从人的嗜铬细胞瘤中分离到的多肽类激素,具有多种生物学功能,后来的研究证实AM是降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)家族的一个成员,和著名的疼痛相关肽CGRP氨基酸序列和三维结构上有着相似性。近阶段研究证实AM是一种疼痛相关肽,参与疼痛调节过程,但机制尚不明确。本实验研究以实验室过去的在体模型的研究工作为基础,得出AM能活化小胶质细胞这一推论,为证实这一推论,我们建立了一种离体培养高纯度小胶质细胞的细胞培养方法,然后研究AM对小胶质细胞的作用。实验方法：建立小胶质细胞的离体原代培养技术,并以此为基础,进一步研究不同浓度的AM对小胶质细胞的作用,通过实时定量PCR技术和免疫细胞化学染色的方法,检测小胶质细胞的AM受体和CGRP受体的表达变化和小胶质细胞形态的变化。研究结果：建立小胶质细胞离体原代培养技术,对比了经典的小胶质细胞培养法和营养饥饿处理的培养法,对比经典恒温振荡法、利多卡因分离法2种分离方法优劣,选取能够获得高纯度,高质量,数量多的小胶质细胞的改进于经典恒温振荡法的饥饿培养震荡法作为本实验纯化小胶质细胞的实验技术。检测不同浓度AM(1-100 nM)和AM不同作用时间(1 d、3d)时,10 nM和100 nM AM浓度下作用3d后,小胶质细胞胞体变大,突起回缩。小胶质细胞的AM受体和CGRP受体的表达上调。研究结论：实验结果表明：①在培养过程中加入饥饿处理这一过程有助于获得更多的,状态好的小胶质细胞。②AM能够使小胶质细胞表面的AM受体和CGRP受体的mRNA表达增加。③AM能引起小胶质细胞细胞形态和细胞功能的改变。
【关键词】：肾上腺髓质素 小胶质细胞 OX-42 肾上腺髓质素受体 qRT-PCR
【学位授予单位】：福建师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-4
• 中文文摘4-9
• 绪论9-19
• 1 肾上腺髓质素及其受体9-12
• 1.1 肾上腺髓质素(Adrenomedullin)9-10
• 1.2 肾上腺髓质素受体10-11
• 1.3 AM及受体与疼痛11-12
• 2 胶质细胞(Glial cell)12-17
• 2.1 星形胶质细胞(astrocyte)13
• 2.2 小胶质细胞(microglia)13-17
• 2.2.1 小胶质细胞的活化与疼痛14-17
• 3 本课题的立题意义17-19
• 第一章 小胶质细胞的原代培养、分离纯化及纯度鉴定19-35
• 前言19
• 1.1 实验材料19-21
• 1.1.1 实验动物19-20
• 1.1.2 实验仪器和器材工具20
• 1.1.3 主要实验试剂20
• 1.1.4 实验所需的部分试剂、溶液的配制20-21
• 1.2 实验方法21-24
• 1.2.1 小胶质细胞的原代培养21-22
• 1.2.2 小胶质细胞的纯化22-24
• 1.2.3 小胶质细胞纯度鉴定24
• 1.3 统计学处理24-25
• 1.4 实验结果25-30
• 1.4.1 神经胶质细胞混合培养25-27
• 1.4.2 纯化出的小胶质细胞27-28
• 1.4.3 小胶质细胞免疫细胞化学鉴定28-29
• 1.4.4 小胶质细胞的纯度统计29-30
• 1.5 讨论30-35
• 第二章 AM对小胶质细胞的作用——小胶质细胞的形态变化35-45
• 前言35
• 2.1 实验材料35-37
• 2.1.1 实验动物35
• 2.1.2 主要试验仪器和器材工具35-36
• 2.1.3 主要实验试剂36
• 2.1.4 实验所需部分试剂的配制36-37
• 2.2 实验方法37-39
• 2.2.1 小胶质细胞的培养和分离纯化37-38
• 2.2.2 实验分组和药物处理38
• 2.2.3 免疫细胞化学染色38-39
• 2.3 实验结果39-43
• 2.3.1 给药AM后小胶质细胞的显微观察39-41
• 2.3.2 小胶质细胞的免疫细胞化学染色鉴定41-43
• 2.4 讨论43-45
• 第三章 AM对小胶质细胞的作用——AM受体的表达变化45-63
• 前言45
• 3.1 实验材料45-49
• 3.1.1 实验动物45-46
• 3.1.2 实验仪器和器材工具46
• 3.1.3 主要实验试剂46
• 3.1.4 实验所需的部分试剂、溶液的配制46-47
• 3.1.5 本章实验所需引物序列47-48
• 3.1.6 实验中所使用的引物序列与NCBI的基因库中该基因序列的对比48-49
• 3.2 实验方法49-54
• 3.2.1 小胶质细胞的原代培养49-50
• 3.2.2 小胶质细胞的分离纯化50
• 3.2.3 小胶质细胞的纯培养和药物处理50-51
• 3.2.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)51-54
• 3.3 统计学处理54-55
• 3.4 实验结果55-61
• 3.4.1 RNA完整性检测结果55
• 3.4.2 引物扩增效率的鉴定55-56
• 3.4.3 实时荧光定量PCR产物的特异性鉴定56-57
• 3.4.3.1 实时定量PCR实验的熔解曲线56-57
• 3.4.3.2 实时定量PCR产物的电泳图谱57
• 3.4.4 AM受体和CGRP受体的mRNA的相对表达量57-61
• 3.5 讨论61-63
• 第四章 结论63-65
• 参考文献65-71
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果71-73
• 致谢73-75
• 个人简历75-79

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